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文檔簡介
1、赭曲霉毒素A(OTA)是一種具有很強毒性的真菌毒素,其毒性在真菌毒素家族中位列第二位,僅次于黃曲霉毒素。OTA在自然界分布廣泛,不僅污染谷物糧食,還嚴重污染動物性食品,對人類構(gòu)成極大的威脅。鑒于食品安全問題關(guān)乎整個社會的安危,應(yīng)當(dāng)引起全世界的高度關(guān)注,因此建立OTA的高靈敏簡便快速分析方法越發(fā)受到科研人員的重視。本論文基于不同的傳感模式和化學(xué)發(fā)光機理,構(gòu)建了幾種不同的適體傳感器,從而實現(xiàn)了OTA的化學(xué)發(fā)光檢測。且這幾種OTA適體傳感器均
2、以磁性微球作為分離和固定載體,實現(xiàn)傳感器的均相反應(yīng)異相分離。整篇論文內(nèi)容可分為如下三個部分:
第一部分基于 OTA適體鏈上的鳥嘌呤(G)堿基與化學(xué)發(fā)光試劑苯甲酰甲醛(PG)的瞬時衍生化反應(yīng)產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的原理,以O(shè)TA適體為檢測探針,建立了一種無標記適體傳感器,采用化學(xué)發(fā)光法(CL)實現(xiàn)了OTA的定量分析。隨著待測OTA濃度的增大,傳感器CL值逐漸減小,對比未加入OTA的空白組,引起的CL變量(?CL)逐漸增大。優(yōu)化實驗條件下,
3、OTA濃度在0.1~50ng/mL范圍內(nèi),其對數(shù)值(X)與?CL(Y)呈現(xiàn)較好線性關(guān)系(r2=0.9952),最低檢出限為0.1ng/mL。對紅酒樣品進行加標回收,回收率在103.3%~112.5%之間,相對標準偏差(RSD)在4.2%~7.2%之間(n=3)。另外,結(jié)果顯示該無標記適體傳感器化學(xué)發(fā)光檢測OTA具有較高特異性。
第二部分以金納米粒子作為標記物,建立了一種適體傳感器,利用納米金催化魯米諾體系產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的機制,實
4、現(xiàn)OTA的定量分析。本法以O(shè)TA適體作為固定相,利用OTA與納米金標記的報告序列競爭結(jié)合磁性微球表面OTA適體,從而得到OTA濃度與CL信號的呈一定相關(guān)性。最優(yōu)實驗條件下,OTA濃度在0.01~20ng/mL范圍內(nèi),其對數(shù)值( X)與?CL( Y)呈良好線性關(guān)系(r2=0.9922),最低檢出限為0.01ng/mL。加標回收率在104.1%~112.7%之間, RSD值在5.9%~8.7%之間(n=3)。經(jīng)考察,采用納米金標記的適體傳感
5、器化學(xué)發(fā)光檢測OTA具有良好特異性。
第三部分沿襲第二部分的傳感原理,僅以辣根過氧化物酶(HRP)代替納米金作為標記物,利用HRP催化魯米諾體系產(chǎn)生化學(xué)發(fā)光的原理,從而定量分析OTA。最優(yōu)實驗條件下,OTA濃度在0.01~50ng/mL范圍內(nèi),其對數(shù)值(X)與?CL(Y)線性相關(guān)(r2=0.9898),最低檢出限為0.01ng/mL。加標回收率在98.5%~109.3%之間,RSD值在5.2%~7.7%之間(n=3)。另外,本
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