西方蜜蜂(Apis mellifera)王漿蛋白mrjp6和mrjp8的表達與功能研究.pdf

1、蜂王漿及主要蛋白組分王漿蛋白家族在蜜蜂生物學以及養(yǎng)蜂生產(chǎn)中具有十分重要的意義和作用，王漿蛋白家族共有10個成員，其中的MRJP1~5在蜂王漿中的含量很高，而 MRJP6~9的含量則極少甚至檢測不到。為探究王漿蛋白家族中含量極少的成員MRJP6和MRJP8的基因表達與相關(guān)生物學功能，本課題對MRJP6基因在不同發(fā)育時期的三型蜂及其各組織部位的表達特性進行了研究，同時，利用RNA干擾技術(shù)系統(tǒng)的探討了利用dsRNA干擾MRJP8基因的表達。具

2、體結(jié)果如下：
　　首先，為了弄清 MRJP6基因在意大利蜜蜂體內(nèi)的時空表達情況，為進一步的功能研究提供依據(jù)。本研究利用實時熒光定量 PCR技術(shù)對西方蜜蜂不同級型、發(fā)育時期和組織內(nèi)的mrjp6表達量進行檢測和分析。結(jié)果表明，mrjp6在蜜蜂幼蟲和蛹期的表達水平較低，與對照基本一致，但在成年蜜蜂體內(nèi)表達量顯著提高，約為對照的25~28倍(p<0.05)；在成年三型蜂體內(nèi)，其在雄蜂體內(nèi)表達量低，約為對照的25倍，而在雌性的工蜂和蜂王體內(nèi)

3、表達量明顯較高，可達28倍(p<0.05)。這說明mrjp6的表達與蜜蜂的性別有關(guān)。但其在工蜂和蜂王之間的表達沒有差異，顯示其表達與蜜蜂級型無關(guān)；進一步的研究表明，成年工蜂體內(nèi)，mrjp6在哺育蜂和采集蜂體內(nèi)表達量很高且比較穩(wěn)定，通過對不同組織的檢測表明該基因主要是在成年蜜蜂的頭部特異性高表達。作為王漿蛋白家族的一員，mrjp6在成年雌性蜜蜂頭部高水平表達，但又與典型的一般王漿蛋白在9日齡前后哺育蜂體內(nèi)高表達、其他階段低表達的模式不同，

4、說明其具有不同于一般王漿蛋白的功能，分析其可能與蜜蜂神經(jīng)系統(tǒng)的功能以及成年雌性蜜蜂復雜的行為發(fā)育模式有關(guān)。
　　其次，為了探究 MRJP8在意大利蜜蜂體內(nèi)的生物學功能，揭示其表達機制，本課題設(shè)計了試劑盒合成dsRNA和工程菌合成dsRNA兩種dsRNA合成途徑，并通過飼喂和注射兩種方法對 mrjp8進行干擾試驗。結(jié)果表明，在用試劑盒合成 dsRNA的干擾試驗中，1μg飼喂干擾條件下工蜂和蜂王的死亡率都很高，達到75％；當濃度降至5

5、0 ng時，飼喂干擾對死亡率幾乎沒有影響。兩種不同濃度飼喂干擾試驗對沉默工蜂和蜂王體內(nèi)mrjp8的表達無效果。另一方面，利用1μg試劑盒合成dsRNA注射干擾剛出房工蜂的試驗中，無論是蛋白層面還是基因?qū)用娑急憩F(xiàn)出試驗組和對照組無差別。在用mrjp8-L4440-HT115工程菌誘導合成dsRNA的飼喂干擾試驗中，飼喂的菌濃度越高工蜂的死亡率也越高。在4×109濃度工程菌飼喂干擾下，mrjp8在工蜂體內(nèi)的表達量呈現(xiàn)下降趨勢，但差異不顯著。

6、
　　本課題利用熒光定量技術(shù)全面定量分析了西方蜜蜂mrjp6的表達情況，發(fā)現(xiàn)mrjp6在三型蜂體內(nèi)不存在級型差異，在雌性成年蜜蜂體內(nèi)表達高于雄性蜜蜂，在工蜂體內(nèi)存在頭部特異性高表達，揭露其可能與蜜蜂神經(jīng)系統(tǒng)功能和雌性成年蜜蜂發(fā)育有關(guān)。在利用dsRNA干擾西方蜜蜂mrjp8的試驗中，飼喂dsRNA的方法使得成年工蜂死亡率升高，通過不同濃度對工蜂和蜂王進行飼喂干擾和注射干擾都沒能使mrjp8表達量顯著降低，試驗結(jié)果顯示mrjp8或許在