利用病毒介導沉默技術高通量鑒定馬鈴薯晚疫病水平抗性相關基因功能.pdf

1、病毒誘導基因沉默(Virus-induced gene silencing，VIGS)技術是一種RNA介導的植物抗病毒防御反應機制，VIGS實驗技術應用在基因功能研究和高通量基因組研究中能夠高效快速的鑒定基因功能缺失后表觀性狀改變。
　　 馬鈴薯晚疫病水平抗性是一種由微效多基因控制的，具有非小種專化性的數(shù)量抗性。其抗病程度雖然不及垂直抗性，但是對很多生理小種均有抗性，并且有著多重的抗病機制，具有廣譜性、持久性和穩(wěn)定性，同時能夠降

2、低晚疫病生理小種的選擇壓力，一定程度上延緩病原菌的變異。為了解晚疫病水平抗性的分子基礎，明確水平抗性形成過程中相關基因在抗性網(wǎng)絡中的位置與重要性，本研究挑選馬鈴薯晚疫病水平抗性相關基因，在本氏煙草利用VIGS技術沉默目標基因，對目標基因沉默煙草進行晚疫病抗性鑒定，篩選沉默后晚疫病抗性顯著降低的目標基因作為馬鈴薯晚疫病水平抗性重要侯選基因。主要實驗結(jié)果如下：
　　 1．挑選晚疫病水平抗性相關基因，與本氏煙草cDNA數(shù)據(jù)庫比對得到4

3、5個與本氏煙草同源性較高，并且含有23bp以上連續(xù)匹配序列的ESTs作為實驗篩選的目標基因片段。
　　 2．根據(jù)已知序列設計引物擴增獲馬鈴薯cDNA，擴增獲得38個目標基因片段，
　　 構(gòu)建了TRV病毒重組載體，并將其轉(zhuǎn)入農(nóng)桿菌GV3101。
　　 3．在本氏煙草材料用VIGS技術將與目標基因同源性較高的內(nèi)源基因進行沉默。RT-PCR技術鑒定了部分本氏煙草內(nèi)源目標基因沉默效果，確定VIGS實驗體系能夠達到沉默煙草