IL-33在肺源性ARDS和非肺源性ARDS中表達(dá)差異的初步探討.pdf

1、目的：
　　研究白介素-33（Interleukin-33，IL-33）在肺源性急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome，ARDS）和非肺源性ARDS中的促炎作用，并探討其在早期輔助ARDS診斷中的臨床意義。
　　方法：
　　1.從收集的ARDS患者和健康對(duì)照者的血漿標(biāo)本中隨機(jī)抽取8個(gè)肺源性ARDS患者和6個(gè)非肺源性ARDS患者以及24個(gè)健康對(duì)照者的血漿標(biāo)本，ELISA

2、或細(xì)胞因子磁珠分選法檢測(cè)其血漿中IL-33、TNF-α、IL-1β、IL-2、IL-6、IFN-γ、CXCL1、CXCL8、CXCL10的水平。
　　2.120只雄性C57BL/6野生型小鼠隨機(jī)分成6組，非肺源性肺損傷組（CLP組）、假手術(shù)組（sham組）、肺源性肺損傷組（LPS組）、空白對(duì)照組（Control組）、IL-33抗體組（LPS+anti-IL-33組）和抗體對(duì)照組（LPS+IgG組），N=20/組。CLP組小鼠行盲腸

3、結(jié)扎穿孔制備非肺源性肺損傷模型，sham組小鼠只做一腹部切口，不行盲腸結(jié)扎穿孔。LPS組小鼠氣管滴注50μl含50μg LPS的PBS制備肺源性肺損傷模型，Control組給予50μl的PBS。在氣管滴注 LPS30分鐘前，分別給予LPS+anti-IL-33組腹腔注射100mg的IL-33抗體，LPS+IgG組腹腔注射等量的IgG。在術(shù)后或給藥后6、12、24小時(shí)分別觀察小鼠的一般情況；測(cè)量并計(jì)算肺組織的濕干重比以評(píng)估小鼠的肺水腫情況

4、；肺組織行HE染色并在光鏡下觀察其形態(tài)學(xué)改變；免疫組化和qRT-PCR檢測(cè)肺組織內(nèi)IL-33蛋白和mRNA的表達(dá)情況；ELISA檢測(cè)小鼠血清中 IL-33、TNF-α、IL-6、TGF-β1、IFN-γ、CXCL1、CXCL8、CXCL10水平的變化。
　　結(jié)果：
　　1.人血漿中IL-33水平及其與其它細(xì)胞因子的相關(guān)性
　　ARDS患者血漿中IL-33水平較健康對(duì)照組明顯升高（P＜0.001），而且肺源性ARDS患者

5、血漿中IL-33的濃度較非肺源性ARDS患者明顯升高（P＜0.01），非肺源性ARDS患者與健康對(duì)照組比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。對(duì)所有ARDS患者的血漿中IL-33的濃度進(jìn)行ROC曲線分析，得到其臨界值為3.24 pg/ml，特異性、敏感性、陰性預(yù)測(cè)值和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值分別為79%、86%、90%和71%；而只對(duì)肺源性ARDS患者血漿中IL-33的濃度進(jìn)行ROC曲線分析，得到其臨界值為5.29 pg/ml，特異性、敏感性、陰性預(yù)測(cè)

6、值和陽(yáng)性預(yù)測(cè)值分別為100%、87.5%、96%和100%。IL-33和其它細(xì)胞因子之間的相關(guān)性分析示ARDS患者血漿中IL-33水平與IFN-γ（r=0.715，P＜0.01）和IL-2（r=0.680，P＜0.05）成明顯的正相關(guān)。
　　2.小鼠一般情況
　　CLP組和LPS組小鼠在術(shù)后或給藥后6小時(shí)均開(kāi)始出現(xiàn)活動(dòng)減少、呼吸急促、精神萎靡、體溫下降、進(jìn)食減少、眼部可見(jiàn)膿性分泌物、毛發(fā)直立無(wú)光澤、腹瀉等癥狀，并隨著時(shí)間的延

7、長(zhǎng)癥狀逐漸加重，CLP組小鼠24小時(shí)的存活率為50%（5/10只），LPS組小鼠24小時(shí)存活率為100%。LPS+anti-IL-33組小鼠的表現(xiàn)較LPS組有所減輕，LPS+IgG組與LPS組表現(xiàn)無(wú)明顯差異，sham組和Control組小鼠表現(xiàn)與正常小鼠無(wú)明顯差異。
　　3.小鼠肺組織病理改變
　　光鏡下觀察經(jīng)HE染色的肺組織，CLP組和LPS組小鼠肺組織可見(jiàn)明顯水腫、肺泡壁廣泛增厚、肺泡塌陷、肺泡內(nèi)出血和大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，

8、LPS+anti-IL-33組可見(jiàn)上述改變較LPS組明顯減輕，LPS+IgG組與LPS組比較無(wú)明顯差異，sham組和Control組均未見(jiàn)明顯的肺損傷及炎癥表現(xiàn)。
　　4.小鼠肺組織濕干重比
　　與對(duì)照組比較，CLP組和LPS組小鼠肺組織的濕干重比均明顯升高（P＜0.001），LPS+anti-IL-33組較LPS組明顯下降（P＜0.001），LPS+IgG組與LPS組比較無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　5.小鼠血清

9、中IL-33和其它細(xì)胞因子水平的變化
　　CLP組小鼠血清中IL-33水平在各時(shí)間點(diǎn)均不升高（P＞0.05），IL-6、TNF-α和TGF-β1水平在CLP術(shù)后6小時(shí)均顯著升高（P＜0.001）。sham組小鼠血清IL-33、IL-6、TNF-α和TGF-β1水平與正常組比較均未見(jiàn)明顯升高（P＞0.05）。LPS組小鼠血清中IL-33水平在氣管滴注LPS后明顯升高（P＜0.001），TNF-α、IL-6、IFN-γ、CXCL1、C

10、XCL8和CXCL10均較Control組明顯升高（P＜0.05）。LPS+anti-IL-33組小鼠血清中上述細(xì)胞因子均較LPS組下降（P＜0.05），LPS+IgG組小鼠上述細(xì)胞因子水平與LPS組比較無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　6.小鼠肺組織內(nèi)IL-33 mRNA的表達(dá)
　　CLP組和sham組小鼠肺組織內(nèi)IL-33 mRNA的表達(dá)在各時(shí)間點(diǎn)均不升高（P＞0.05）。與Control組比較，LPS組小鼠肺組織內(nèi)IL

11、-33 mRNA的表達(dá)在氣管滴注LPS6小時(shí)后明顯升高（P＜0.01）。
　　7.小鼠肺組織內(nèi)IL-33蛋白的表達(dá)
　　小鼠肺組織免疫組化結(jié)果顯示：CLP組小鼠肺組織內(nèi)IL-33的表達(dá)較sham組無(wú)明顯升高。與Control組比較，IL-33在LPS組小鼠肺組織內(nèi)的表達(dá)明顯升高，LPS+anti-IL-33組小鼠肺組織內(nèi)IL-33的表達(dá)減少，LPS+IgG組小鼠肺組織內(nèi)IL-33的表達(dá)與LPS組比較無(wú)明顯差異。
　　結(jié)