常見天然甾體衍生物對UGT1A4的抑制研究.pdf

1、目的:評價天然產(chǎn)物中常見甾體皂苷及其苷元類成分對葡萄糖醛酸轉(zhuǎn)移酶1A4(UGT1 A4)的抑制效應(yīng)，并確定其抑制活性在12種重組UGTs亞型中的選擇性;通過系統(tǒng)研究甾體皂苷及其苷元類成分對UGT1 A4抑制動力學(xué)和抑制類型進一步預(yù)測臨床可能存在的藥物-藥物相互作用(DDI);構(gòu)建常見天然甾體皂苷及苷元類成分結(jié)構(gòu)與其對UGT1 A4抑制活性之間的定量構(gòu)效關(guān)系(3D-QSAR)，為臨床甾體皂苷與苷元類成分及富含該類成分的中藥的合理用藥提供指

2、導(dǎo)。
　　方法:(1)體外試驗:利用體外孵育體系，評價不同天然甾體皂苷及苷元類成分對UGT1 A4介導(dǎo)的三氟拉嗪葡萄糖醛酸化代謝的抑制活性;利用4-甲基傘形酮(4-MU)作為UGTs的廣譜底物，選取對UGT1 A4活性較好的化合物進一步評價其在12種人源的重組單酶中的抑制選擇性。(2)系統(tǒng)分析甾體皂苷及其苷元類成分對UGT1 A4的抑制動力學(xué)，求算其抑制動力學(xué)參數(shù)，結(jié)合藥代動力學(xué)參數(shù)通過相關(guān)公式，推測其可能存在的DDI;在人的原代

3、肝細胞中評價部分天然甾體衍生物與UGT1 A4催化代謝的臨床常用藥物的藥物相互作用;(3)精確測定43種甾體皂苷及其苷元類成分對UGT1 A4的抑制IC50值，利用精確IC50和化合物結(jié)構(gòu)，構(gòu)建比較分子場分析法(CoMFA)和比較分子相似性分析方法(CoM SIA)模型，確定其結(jié)構(gòu)與活性的定量構(gòu)效關(guān)系(3D-QSAR)，為甾體及其皂苷類成分對UGT1 A4可能存在抑制作用進行預(yù)測提供了一種有效的手段。
　　結(jié)果:本實驗篩選的43個

4、常見甾體皂苷及苷元中，37個化合物對UGT1A4具有顯著的抑制活性。其中，龍舌蘭皂苷元(1)，吉托皂苷元(4)，劍麻皂苷元(5)，澳洲茄胺(6)延齡草素(15)和纖細薯蕷皂苷(24)對UGT1 A4表現(xiàn)出了特異性的抑制作用，而對其它UGTs單酶幾乎沒有作用;而連糖的甾體皂苷如prosapogenin A(19), spongipregnoloside A(20), pseudoprotodioscin(35), YS-IX(36)，pa

5、llidifloside A(37) and pallidifloside H(38)對各種UGTs亞型都表現(xiàn)出了輕微的抑制活性;通過考察薯蕷皂苷元(2)，魯斯可皂苷元(3)，吉托皂苷元(4)，劍麻皂苷元(5)，澳洲茄胺(6)和延齡草酸(15)對UGT1 A4介導(dǎo)的探針反應(yīng)—三氟拉嗪的葡萄糖醛酸化代謝的抑制動力學(xué)研究，抑制形式均表現(xiàn)為競爭性抑制，抑制動力學(xué)參數(shù)Ki分別為0.6，0.18，1.1，0.7，0.8和12.3μM。在人肝微粒體

6、中，甾體衍生物如薯蕷皂苷元(2)，魯斯可皂苷元(3)，劍麻皂苷元(5)和澳洲茄胺(6)等均可以抑制經(jīng)由UGT1 A4催化代謝的臨床藥物如三氟拉嗪、奧氮平、咪達唑侖和他莫昔芬等的葡萄糖醛酸化代謝，IC50都小于10μM;在人原代肝細胞中薯蕷皂苷元(2)，魯斯可皂苷元(3)，劍麻皂苷元(5)和澳洲茄胺(6)均可以明顯抑制他莫昔芬的葡萄糖醛酸化代謝。利用精確求得的43個甾體類衍生物對UGT1 A4代謝抑制的IC50值，我們成功構(gòu)建了CoMFA

7、模型和CoMSIA模型，為以后甾體皂苷及其苷元類成分對UGT1 A4的抑制作用及其在臨床合理應(yīng)用提供了寶貴意見和參考。
　　結(jié)論:本研究結(jié)果表明，吉托皂苷元(4)，劍麻皂苷元(5)，澳洲茄胺(6)等均可以作為體外代謝研究中UGT1 A4的選擇性抑制劑進行廣泛使用;并且這些化合物對UGT1 A4的抑制類型均表現(xiàn)為競爭性抑制。更重要的是，在人原代肝細胞中，我們發(fā)現(xiàn)日常生活中廣泛食用的成分，例如薯蕷皂苷元(2)，魯斯可皂苷元(3)，吉托