多種測試手段研究小分子與血清白蛋白的作用.pdf

1、本論文共分為五個(gè)部分,首先對近年來小分子與血清白蛋白相互作用的現(xiàn)狀進(jìn)行綜述,接下來分章闡述本人在小分子與血清白蛋白(serumalbumin,SA)相互作用領(lǐng)域所做的工作。光譜法和其他方法手段在小分子與生物分子相互作用中的應(yīng)用也越來越廣泛,然而結(jié)合化學(xué)計(jì)量學(xué)來研究兩者作用的報(bào)道還相對比較少。本論文就嘗試在此領(lǐng)域進(jìn)行一部分工作。
　　 第一部分:本節(jié)首先簡要介紹了血清白蛋白的結(jié)構(gòu)、功能以及性質(zhì),然后闡述了小分子與SA作用的研究的意

2、義,然后介紹了研究內(nèi)容和研究手段。綜述了最新研究的進(jìn)展,化學(xué)計(jì)量學(xué)在研究中的應(yīng)用,以及研究的前景展望。
　　 第二部分:本節(jié)用熒光光譜法研究在模擬人體生理pH條件下多巴酚丁胺與牛血清白蛋白(BSA)的相互作用。結(jié)果表明,多巴酚丁胺對BSA內(nèi)源性熒光有較強(qiáng)的猝滅作用,且猝滅類型為靜態(tài)猝滅。根據(jù)猝滅結(jié)果求得了298K、301K和304K三個(gè)不同溫度下多巴酚丁胺與牛血清白蛋白結(jié)合作用的結(jié)合位點(diǎn)數(shù)、結(jié)合常數(shù)以及反應(yīng)的熱力學(xué)參數(shù),由此確定

3、出兩者之間的主要作用力為疏水作用力。本文進(jìn)而應(yīng)用競爭實(shí)驗(yàn)確定了多巴酚丁胺在BSA上的結(jié)合位點(diǎn)為Ⅱ位。用同步熒光光譜法探討多巴酚丁胺對BSA構(gòu)象的影響。
　　 第三部分:在人體生理?xiàng)l件下,應(yīng)用熒光光譜法研究阿司匹林、布洛芬與BSA的相互作用,結(jié)果表明阿司匹林與布洛芬對BSA的內(nèi)源性熒光均有猝滅作用,且當(dāng)阿司匹林與BSA比例為2:1,布洛芬與BSA比例為3:1時(shí)達(dá)到平衡,通過熒光光譜數(shù)據(jù)計(jì)算得出的熱力學(xué)參數(shù)可知阿司匹林與BSA的相互

4、作用力為范德華力和氫鍵。以華法林和安定為探針的位點(diǎn)競爭實(shí)驗(yàn)得出阿司匹林主要結(jié)合在位點(diǎn)Ⅱ上,但也有少數(shù)結(jié)合在位點(diǎn)Ⅰ上。應(yīng)用三維熒光光譜和平衡因子分子法(PARAFAC)研究阿司匹林、布洛芬與BSA的結(jié)合競爭表明布洛芬的競爭能力強(qiáng)于阿司匹林,布洛芬使得阿司匹林-BSA復(fù)合物中的阿司匹林被競爭出來。
　　 第四部分:抗癌藥物苯達(dá)莫司汀、地塞米松與BSA的研究是在pH=7.4條件下借助于熒光紫外等光譜手段進(jìn)行的。熒光猝滅實(shí)驗(yàn)得到猝滅機(jī)理

5、為靜態(tài)猝滅,生成的復(fù)合物BSA.BDM得到其結(jié)合常數(shù)和結(jié)合位點(diǎn)數(shù)分別為5.14×105Lmol-1和1。應(yīng)用多元曲線校正交替最小二乘法(MCR-ALS)運(yùn)算,得出生成復(fù)合物BSA-BDM與前面得到生成復(fù)合物的結(jié)論進(jìn)行相互證明。應(yīng)用位點(diǎn)Ⅰ探針(華法林)和位點(diǎn)Ⅱ探針(布洛芬)對兩種藥物分別進(jìn)行位點(diǎn)競爭實(shí)驗(yàn),結(jié)果表明兩種抗癌藥物均結(jié)合在位點(diǎn)Ⅰ并且BDM的結(jié)合常數(shù)相對大些。應(yīng)用三維熒光光譜結(jié)合PARAFAC對BSA,BDM,DXM三元體系進(jìn)行解

6、析得到當(dāng)DXM加入到BDM-BSA復(fù)合物中,DXM會(huì)取代BDM而釋放出來。
　　 第五部分:采用紫外光譜法,熒光光譜法,紅外光譜法和電化學(xué)方法綜合研究四種抗氧化劑與BSA的相互作用。通過一系列的對比實(shí)驗(yàn)得到功能相同,結(jié)構(gòu)相似的四種抗氧化劑與BSA相互作用的差異。通過單純的紫外光譜圖初步判斷四種抗氧化劑與BSA之間的作用。應(yīng)用熒光光譜更加確定兩者之間的相互作用。紅外光譜法得到了四種抗氧化劑對血清白蛋白二級(jí)結(jié)構(gòu)的改變情況,改變大小為