腸道菌群紊亂對(duì)雌鼠受孕胚胎發(fā)育的影響研究.pdf

1、目的：
　　探討腸道菌群影響雌鼠受孕發(fā)育的機(jī)制，為利用腸道菌群調(diào)整和改善不孕癥打下基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1.實(shí)驗(yàn)分組：選擇清潔級(jí)4周齡Swiss雌性小鼠(ICR)264只。隨機(jī)分為2組：腸道菌群紊亂組與正常對(duì)照組。
　　2.實(shí)驗(yàn)批次：分四批次（春夏秋冬），每批次66只雌性Swiss小鼠，其中腸道菌群紊亂組與正常對(duì)照組各33只。
　　3.實(shí)驗(yàn)周期：每批次實(shí)驗(yàn)小鼠周期為46天，腸道菌群紊亂組小鼠自第1天起進(jìn)行

2、腸道菌群紊亂至28天止，之后進(jìn)行受孕，雌鼠與雄鼠進(jìn)行合籠，合籠比例為雌鼠∶雄鼠=3∶1。連續(xù)觀察雌性小鼠孕栓3天，出現(xiàn)孕栓的雌性小鼠繼續(xù)飼養(yǎng)16天處死，沒(méi)有出現(xiàn)孕栓小鼠當(dāng)即處死。
　　4.菌群失衡模型的建立：菌群紊亂組雌性小鼠用400mg/ml頭孢曲松鈉灌胃，灌胃劑量為0.2ml/次/只，一日2次，間隔6-8小時(shí)，連續(xù)四周，同時(shí)設(shè)置正常對(duì)照組，用生理鹽水灌服，劑量方法同上。
　　5.孕栓檢查：合籠交配后于第二天早上檢測(cè)孕栓。

3、觀察雌性小鼠陰道白色凝固殘留物。有殘留物的即為孕栓及受孕。
　　6.樣本收集：收集雌性小鼠卵巢、血清、胚胎小鼠腸道、腸內(nèi)容物和糞便進(jìn)行指標(biāo)檢測(cè)。
　　7.應(yīng)用ELISA方法對(duì)各組小鼠血清雌酮、雌二醇、睪酮、雄烯二酮水平進(jìn)行檢測(cè)。
　　8.應(yīng)用PCR-DGGE方法對(duì)各組小鼠腸道菌群進(jìn)行分析，對(duì)差異明顯條帶進(jìn)行切膠回收、純化、測(cè)序，測(cè)序結(jié)果經(jīng)GenBank比對(duì)后確定細(xì)菌種類;
　　9.收集雌鼠卵巢，進(jìn)行HE染色切片，

4、觀察卵巢形態(tài)變化。
　　結(jié)果：
　　1.菌群紊亂組受孕鼠數(shù)為79只，受孕率為81.4％;正常對(duì)照組受孕鼠數(shù)為69只，受孕率為71.1％，兩組差別顯著（P＜0.05）。與正常對(duì)照組相比，菌群紊亂組受孕率高于正常組10.3％。
　　2.季節(jié)的變化和菌群紊亂對(duì)受孕率均有影響，與正常對(duì)照組相比，冬季菌群紊亂組變化最為明顯，受孕率為87.0％;春季和夏季菌群紊亂組變化次之，受孕率分別為81.80％和76.0％;秋季菌群紊亂組變化

5、不明顯，受孕率為62.9％。
　　3.菌群紊亂組的死胎數(shù)為32只，死胎率為4.44％，與正常對(duì)照組相比，兩組間有顯著差別（P＜0.05），菌群紊亂組的死胎率高于正常對(duì)照組。
　　4.在雌鼠的胎鼠中發(fā)現(xiàn)胎鼠腸道具有腸道菌群的16srna的序列。
　　5.與對(duì)照組相比，菌群紊亂組孕鼠雌酮、雌二醇含量降低(p＜0.05);雄烯二酮含量升高(p＜0.05)，睪酮含量沒(méi)有顯著變化(p＞0.05)
　　6.與正常對(duì)照組雌鼠卵