重組鐵蛋白的殼聚糖修飾及對理化性質(zhì)的影響.pdf

1、鐵蛋白是由24個(gè)同源或異源亞基所結(jié)合成的一個(gè)蛋白質(zhì)多聚體，廣泛存在于植物、動物、微生物中，其內(nèi)部具有直徑為8nm的小腔體，殼中央可以儲存4500個(gè)鐵離子。但鐵蛋白作為一種蛋白組分，其理化性質(zhì)極易受到外界環(huán)境的影響。多糖對蛋白質(zhì)的修飾能夠改善蛋白質(zhì)的多種功能性質(zhì)，可以作為功能配料應(yīng)用于食品及醫(yī)藥領(lǐng)域，已經(jīng)受到越來越多的關(guān)注。多糖與蛋白質(zhì)發(fā)生相互作用的主要方式有共價(jià)作用和靜電相互作用。本論文主要研究了利用殼聚糖對鐵蛋白進(jìn)行表面修飾，采用了兩

2、種方式:靜電作用和共價(jià)作用，其后研究了兩種修飾下鐵蛋白的分子結(jié)構(gòu)及功能特性。
　　首先利用殼聚糖在低pH值（pH6.0，低于其pKa值）下帶正電荷，其可以與鐵蛋白外表面的酸性氨基酸殘基發(fā)生靜電相互作用，生成鐵蛋白-殼聚糖聚電解質(zhì)聚合物。通過濁度分析和Zeta-電位分析發(fā)現(xiàn)鐵蛋白與殼聚糖發(fā)生靜電相互作用的最佳pH值為6.0，通過熒光光譜進(jìn)一步確定靜電作用在鐵蛋白與殼聚糖的結(jié)合中起著重要作用，大約10個(gè)殼聚糖分子結(jié)合單個(gè)鐵蛋白。通過體

3、外模擬消化實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)殼聚糖對鐵蛋白的靜電修飾可以提高鐵蛋白的抗酶解穩(wěn)定性。
　　其次，利用鐵蛋白分子中氨基酸側(cè)鏈的自由氨基和殼聚糖分子還原末端的羰基之間的羰氨反應(yīng)（即美拉德反應(yīng)）制備了鐵蛋白-殼聚糖接枝物。通過SDS-PAGE電泳和傅里葉紅外光譜分析得出成功制備出鐵蛋白-殼聚糖接枝物。以接枝率為衡量標(biāo)準(zhǔn)，以摩爾比1∶100（鐵蛋白:殼聚糖），55℃的溫度和75％相對濕度，干燥加熱24h的制備工藝最佳。通過褐變指數(shù)分析，在一定范圍內(nèi)，