虎杖苷對(duì)丙酮醛介導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用.pdf

1、研究目的:本研究擬探討虎杖苷(Polydatin，PD)對(duì)丙酮醛(Methylglyoxal，MGO)介導(dǎo)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical veinendothelial cells，HUVECs)凋亡的保護(hù)作用及其機(jī)制，為當(dāng)前糖尿病合并心血管類疾病的預(yù)防和治療提供重要理論依據(jù)。
　　研究方法:(1)分別采用濃度梯度的PD（0、25、50和100μM）預(yù)先作用HUVECs2h，MGO(200μM)刺激后，TUNEL

2、染色法檢測(cè)細(xì)胞凋亡; DCFH-DA熒光探針檢測(cè)活性氧(reactive oxygen species，ROS)的產(chǎn)生;JC-1熒光探針檢測(cè)線粒體膜電位（mitochondria membrane potential，△Ψm）的改變;免疫印跡(Westernblotting)檢測(cè)Akt磷酸化(p-Akt)水平的變化。(2)應(yīng)用10mM的抗氧化劑(N-acetyl-L-cysteine，NAC)，1μM的線粒體保護(hù)劑環(huán)孢素A(Cyclos

3、porin A，CsA)和50μM的Akt抑制劑LY29400(LY)干預(yù)后，檢測(cè)MGO對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。(3)動(dòng)物水平對(duì)C57BL/6J小鼠腹腔注射生理鹽水(normal saline,NS), MGO(50mg/kg), MGO(50mg/kg)+PD(50mg/kg)后（每天注射1次，連續(xù)注射14d），取胸主動(dòng)脈檢測(cè)細(xì)胞凋亡。
　　研究結(jié)果:(1)PD抑制MGO介導(dǎo)HUVECs的凋亡(P＜0.01)。(2)PD抑制MGO介導(dǎo)

4、的ROS產(chǎn)生(P＜0.01)。(3) PD抑制MGO介導(dǎo)的ΔΨm改變(P＜0.01);(4)PD抑制MGO介導(dǎo)的p-Akt水平降低(P＜0.01)。(5)NAC和CsA抑制MGO介導(dǎo)的HUVECs凋亡(P＜0.01); LY抑制PD對(duì)MGO介導(dǎo)細(xì)胞凋亡的保護(hù)作用(P＜0.01)。(6)在動(dòng)物水平PD抑制MGO引起的細(xì)胞凋亡(P＜0.01)。
　　研究結(jié)論:PD保護(hù)MGO介導(dǎo)的HUVECs凋亡，其機(jī)制可能是通過(guò)抑制細(xì)胞ROS產(chǎn)生、抑