改良型大鼠脊髓損傷模型的探討及丹酚酸B對(duì)脊髓損傷的干預(yù)作用.pdf

1、目的：
　　建立一種閉合性大鼠脊髓半離斷損傷模型；在模型基礎(chǔ)上探討中藥制劑丹酚酸B（Salvianolic acid B，SalB）于損傷局部注射對(duì)大鼠脊髓損傷后細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的干預(yù)作用。
　　方法：
　　1.腰段脊髓損傷模型復(fù)制：SD大鼠6只，全身麻醉、無菌狀態(tài)下，縱形切開背部皮膚及筋膜，在不打開椎板的前提下采用注射器針頭制成的脊髓損傷器沿脊柱后棘突T9-T10間隙、緊靠棘突左側(cè)垂直插入脊髓并向左側(cè)做單向擺動(dòng)和上下提

2、拉，造成大鼠腰髓一側(cè)（左側(cè)）離斷性損傷。通過觀察脊髓損傷后大鼠左右側(cè)后肢行走能力的比較、損傷局部形態(tài)學(xué)檢測(cè)及損傷側(cè)肢體的熱痛反應(yīng)、抓力測(cè)試等確定模型的復(fù)制成功。2.采用免疫熒光染色技術(shù)觀察丹酚酸 B對(duì)大鼠腰段脊髓損傷后局部 PirB及Erk1/2表達(dá)的影響。SD雄性大鼠，220-250g。實(shí)驗(yàn)分為三組，每組5-6只大鼠。A組：為對(duì)照組，正常大鼠，不做任何處理。B組：?jiǎn)渭円粋?cè)腰段脊髓損傷組：按照模型復(fù)制方法復(fù)制腰段脊髓損傷模型，同時(shí)利用注

3、射器針頭所連接的注射器向損傷局部或脊髓腔緩慢注射0.9％生理鹽水，30μl/只。C組：丹酚酸B用藥組：一側(cè)腰段脊髓損傷模型復(fù)制后，利用注射器針頭所連接的注射器向損傷局部或脊髓腔內(nèi)緩慢注射丹酚酸 B制劑，5mg/kg注射，總量30μl。各組動(dòng)物在處理后分籠正常飼養(yǎng)，分別在24h、1周、2周后測(cè)后肢抓力。2周后取大鼠脊髓標(biāo)本，處理后用免疫熒光法和Western blot法檢測(cè)脊髓中PirB和ERK1/2蛋白的表達(dá)量。
　　結(jié)果：

4、>　　用自制的注射器針頭使大鼠脊髓損傷后大鼠出現(xiàn)明顯的運(yùn)動(dòng)和感覺功能障礙。大鼠麻醉蘇醒后即刻出現(xiàn)一側(cè)后肢癱瘓、拖地行走，但無排尿及排便失禁，動(dòng)物一般狀態(tài)良好，后期未見合并感染。大鼠左后肢（患側(cè)）對(duì)比右后肢（健側(cè)）的抓力和熱痛反應(yīng)明顯降低（p<0.05）。肉眼觀察大鼠脊髓，術(shù)后24h大鼠傷口處腫脹，1周后傷口愈合，4周時(shí)背部皮膚基本恢復(fù)正常。打開脊椎椎板后可見針頭插入部位位于腰髓段，此處脊髓仍充血腫脹，脊髓組織軟化崩解。顯微鏡下觀察（ H

5、E染色）：術(shù)后大鼠脊髓的損傷區(qū)可見縱行脊髓纖維斷裂，損傷區(qū)域內(nèi)神經(jīng)結(jié)構(gòu)基本消失，髓鞘不可辨認(rèn)。在大鼠脊髓損傷局部注射丹酚酸 B2周后，大鼠的左后肢抓力較損傷組大鼠有明顯提高（p<0.05）。免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示PirB大部分分布于脊髓前角灰質(zhì)中。用藥組較單純脊髓損傷組PirB的表達(dá)顯著降低（p<0.05）。免疫熒光實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，局部注射丹酚酸 B兩周后，損傷側(cè)脊髓 ERK1/2的表達(dá)較單純脊髓損傷組有所升高（p<0.05）。