肝腸間氧化應(yīng)激的相關(guān)性及食品的調(diào)節(jié)作用.pdf

1、肝臟和腸道是生物體進(jìn)行食物代謝和吸收的重要器官。近30年來(lái)，大量臨床數(shù)據(jù)和流行病學(xué)調(diào)查顯示肝臟疾病和腸道疾病二者存在強(qiáng)烈的相關(guān)性。盡管肝腸同時(shí)病變或先后病變的發(fā)生機(jī)制還未被闡明，但已有許多研究發(fā)現(xiàn)氧化應(yīng)激在肝腸疾病相關(guān)性上起關(guān)鍵作用。因此，本論文開(kāi)展了系列研究，通過(guò)顯示肝腸間活性氧(ROS)分布的關(guān)聯(lián)性，解析肝腸間氧化應(yīng)激的相關(guān)性，并探討生物體攝入抗氧化食品對(duì)肝腸氧化應(yīng)激乃至整體氧化應(yīng)激系統(tǒng)的調(diào)節(jié)作用。
　　首先，探討了肝腸間氧化

2、應(yīng)激在構(gòu)造上的相關(guān)性。使用ROS探針二氯熒光素雙醋酸鹽（DCFH-DA，25mg/kg體重）尾靜脈注射SD大鼠，其整體熒光成像中膽總管和十二指腸顯現(xiàn)ROS的特征熒光;緊接著，對(duì)膽總管和十二指腸進(jìn)行組織切片，二者熒光成像顯示，ROS的特征熒光均集中分布在結(jié)締組織層上——膽總管的ROS特征熒光集中分布在外膜層上，十二指腸的ROS特征熒光集中分布在粘膜下層，即從膽總管至十二指腸的結(jié)締組織層形成了熒光通道，說(shuō)明了從膽總管外膜層這一結(jié)締組織層連通

3、到十二指腸粘膜下層的結(jié)締組織層，形成了ROS集中分布的通道。由此，我們推測(cè)肝臟氧化應(yīng)激狀態(tài)有可能通過(guò)膽管發(fā)生傳導(dǎo)。為進(jìn)一步證實(shí)上述猜測(cè)，實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)新西蘭兔肝臟左肝葉中部注射20μL過(guò)氧化氫(30％，w/v)的方式誘導(dǎo)肝臟氧化應(yīng)激，監(jiān)測(cè)該氧化應(yīng)激所致流經(jīng)膽總管的電流變化。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，注射引起流經(jīng)膽總管的電流迅速上升，電子走向?yàn)閺母闻K至十二指腸，且電流的上升趨勢(shì)在心臟停止跳動(dòng)后依然持續(xù)一段時(shí)間，該電流有可能是線(xiàn)粒體在氧化應(yīng)激時(shí)呼吸鏈漏出的電子

4、的遷移所形成的，說(shuō)明肝臟發(fā)生的氧化應(yīng)激可能以電子傳遞的方式通過(guò)膽管傳導(dǎo)至十二指腸壁。上述結(jié)果，為肝腸間氧化應(yīng)激的相關(guān)性提供了新的證據(jù)。
　　為進(jìn)一步證實(shí)上述肝腸間氧化應(yīng)激相關(guān)性的結(jié)果，我們將專(zhuān)一性清除超氧陰離子自由基(O2·-)的跨膜蛋白酶（Tat-SOD融合蛋白）作用于腸道，分析腸道的抗氧化干預(yù)對(duì)肝臟氧化應(yīng)激狀態(tài)的調(diào)節(jié)作用。實(shí)驗(yàn)以腹腔注射四氯化碳(CCl4)（1mL/kg體重，每周兩次，持續(xù)6周給藥）誘導(dǎo)肝纖維化的SD大鼠為模型

5、，Tat-SOD融合蛋白（25000U/kg體重，每天兩次，持續(xù)4周給藥）以經(jīng)口灌服方式進(jìn)行抗氧化干預(yù)治療。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，腸道上Tat-SOD融合蛋白的抗氧化干預(yù)均可顯著降低SD大鼠的血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)以及肝臟組織中丙二醛(MDA)含量至正常水平(P＜0.01），顯著升高肝臟組織中超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活力(P＜0.01)，并使呈彌漫性纖維化的肝臟得以逆

6、轉(zhuǎn)再生，肝臟組織結(jié)構(gòu)得以顯著修復(fù)。上述結(jié)果說(shuō)明，經(jīng)口灌服Tat-SOD融合蛋白的抗氧化干預(yù)可以達(dá)到逆轉(zhuǎn)肝纖維化的治療作用。我們推測(cè)該Tat-SOD融合蛋白可能透皮進(jìn)入腸壁疏松結(jié)締組織清除該部位所富集或傳遞的O2·-，進(jìn)而可能通過(guò)膽管的橋連緩解肝臟的氧化應(yīng)激狀態(tài)，從而起到對(duì)肝纖維化的修復(fù)。
　　由于氧化應(yīng)激狀態(tài)可能以電子傳遞方式在結(jié)締組織層傳導(dǎo)，且人體經(jīng)絡(luò)系統(tǒng)在解剖學(xué)上與筋膜等結(jié)締組織系統(tǒng)重疊，經(jīng)絡(luò)系統(tǒng)有可能是與之相連臟器氧化應(yīng)激的

7、傳導(dǎo)和調(diào)控系統(tǒng)，因此經(jīng)線(xiàn)上兩個(gè)穴位間電位的測(cè)定有可能精確反應(yīng)沿經(jīng)線(xiàn)氧化應(yīng)激的傳遞，以及反應(yīng)與經(jīng)線(xiàn)相連臟器的氧化應(yīng)激狀態(tài)。由此我們使用穴位間電位實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)法，進(jìn)一步在人體上檢視結(jié)締組織與氧化應(yīng)激的關(guān)系。實(shí)驗(yàn)選取胃經(jīng)的下巨虛穴位(ST39)和內(nèi)庭穴位(ST44)為穴位體表電位監(jiān)測(cè)點(diǎn)，足三里穴位(ST36)為穴位干預(yù)點(diǎn)，分別給予足三里穴位單純按摩、0.2mL空白藥膏按摩、0.2mL Tat-SOD(3000U/mL)藥膏按摩、注射100μL還原

8、型谷胱甘肽鈉(0.12g/mL)和針灸五種干預(yù)，考察其對(duì)胃經(jīng)下游相鄰兩穴位（下巨虛與內(nèi)庭）間電位的影響。結(jié)果顯示:下巨虛與內(nèi)庭間電位隨足三里上按摩的施加或停止出現(xiàn)上升或回落;在按摩停止后抗氧化干預(yù)組的穴位間電位依然在高處波動(dòng)，且在干預(yù)48小時(shí)后抗氧化干預(yù)組的穴位間電位顯著低于物理干預(yù)組，說(shuō)明穴位間電位可準(zhǔn)確反映經(jīng)線(xiàn)上氧化應(yīng)激的傳導(dǎo)。該監(jiān)測(cè)方法有可能成為實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)與經(jīng)線(xiàn)相連臟器的工作狀態(tài)。
　　最后，我們采用穴位間電位實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)方法，跟

9、蹤紅茶（金駿眉）、烏龍茶（水仙巖茶）和綠茶（高山綠茶）三種茶湯的攝入對(duì)人體手少陰心經(jīng)、手太陰肺經(jīng)、足少陰腎經(jīng)、足太陰脾經(jīng)、足厥陰肝經(jīng)、手太陽(yáng)小腸經(jīng)、足少陽(yáng)膽經(jīng)和足陽(yáng)明胃經(jīng)這八條經(jīng)絡(luò)的體表電位影響和即刻生理效應(yīng)。結(jié)果顯示，三種茶湯對(duì)手太陽(yáng)小腸經(jīng)的體表電位的影響最為顯著;三種茶湯均可產(chǎn)生即刻生理效應(yīng)，可出現(xiàn)打嗝、生津、出汗、打哈欠、腸道蠕動(dòng)、手心生熱等生理變化，其中又以紅茶的即刻效應(yīng)最明顯，作用時(shí)間最長(zhǎng);經(jīng)絡(luò)體表電位的波動(dòng)都有相應(yīng)的生理反應(yīng)

10、。其次，我們還測(cè)定了三種茶湯的體外抗氧化活力和粒徑分布，以及跟蹤了動(dòng)物模型飲茶的長(zhǎng)期生理效應(yīng)（三種茶湯的攝入對(duì)以高脂飼料誘導(dǎo)的C57BL/6小鼠肝腸組織氧化應(yīng)激等指標(biāo)的影響），并將其與茶湯的人體經(jīng)絡(luò)體表電位變化和即刻生理效應(yīng)進(jìn)行對(duì)比分析，結(jié)果表明，紅茶茶湯的粒徑最小最均一，其即刻生理效應(yīng)和引起的人體經(jīng)絡(luò)穴位間電位的變化也最明顯，可在一定程度上反應(yīng)茶湯的顆粒大小可影響其即刻效應(yīng);紅茶茶湯的體外抗氧化活性和茶多酚含量最低，但其引起的經(jīng)絡(luò)體表

11、電位變化卻最明顯，說(shuō)明了體外實(shí)驗(yàn)的抗氧化活力的分析結(jié)果，不一定能在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)得到相應(yīng)的表現(xiàn);三種茶湯均具有抑制肥胖形成和緩解肝腸間氧化應(yīng)激的作用。我們推測(cè)，茶湯的抗氧化納米顆粒通過(guò)清除腸壁疏松結(jié)締組織層的ROS，引起腸道平滑肌縮收，產(chǎn)生打嗝等生理反應(yīng)，并可能借助膽管的橋連進(jìn)一步解除肝臟的氧化應(yīng)激，從而預(yù)防脂肪肝及肥胖的發(fā)生;同時(shí)由于人體生物電網(wǎng)絡(luò)系統(tǒng)的存在，肝腸間氧化應(yīng)激的傳遞可能引發(fā)與各臟器相連經(jīng)線(xiàn)上的電位變化。
　　以上研究結(jié)果