介導(dǎo)DNA聚合酶Pol δ小亞基p50泛素化的E3蛋白鑒定.pdf

1、哺乳動(dòng)物的DNA聚合酶δ(Polδ)被認(rèn)為是聚合酶B家族的一個(gè)成員是第一個(gè)被發(fā)現(xiàn)同時(shí)具有5'→3'聚合酶活性和3'→5'外切酶活性的真核DNA聚合酶。早期的研究包括從小牛胸腺或人類胎盤分離得到的Polδ復(fù)合物表明Polδ是僅由p125和p50兩個(gè)亞基組成的二聚體。之后的研究又發(fā)現(xiàn)了2個(gè)新的亞基，即p68/66亞基，一種粟酒裂殖酵母Cdc27或啤酒酵母Polδ及Pol32的一種同源物，p12亞基，類似于粟酒裂殖酵母Polδ的Cdm1.現(xiàn)在

2、哺乳動(dòng)物Polδ被認(rèn)為是至少由p125，p50，p68和p12四亞基組成的異源四聚體。
　　 作為三種主要的聚合酶α(Polα)，δ(Polδ)，andε(Polε)之一，在染色體DNA合成中Polδ通過與增殖細(xì)胞核抗原(PCNA)相互作用而扮演著至關(guān)重要的角色，PCNA是一種環(huán)狀?yuàn)A環(huán)結(jié)構(gòu)的蛋白，是Polδ的輔助蛋白，能刺激Polδ的活性，并在復(fù)制中是不可或缺的因素。
　　 哺乳動(dòng)物通過主動(dòng)防御機(jī)制來(lái)應(yīng)對(duì)DNA損傷，被稱

3、為DNA損傷應(yīng)答(DDR)。這一機(jī)制通過募集或裝備一系列與修復(fù)相關(guān)的蛋白復(fù)合物并激活DNA修復(fù)系統(tǒng)，激活細(xì)胞周期檢查點(diǎn)甚至細(xì)胞凋亡等程序來(lái)應(yīng)對(duì)DNA損傷。近期的研究展示了一種新的哺乳動(dòng)物的應(yīng)對(duì)損傷的機(jī)制，當(dāng)DNA受到紫外照射，或化學(xué)試劑處理，復(fù)制壓力等因素而產(chǎn)生DNA損傷時(shí)，Polδ的小亞基p12會(huì)快速降解使Polδ從四聚體形式轉(zhuǎn)變成三聚體形式。p12的降解依賴于ATR/Chk1激酶信號(hào)途徑并通過泛素化途經(jīng)降解。同時(shí)近期的研究表明當(dāng)處于

4、S期的細(xì)胞經(jīng)紫外照射處理或遺傳毒性試劑處理后所造成的細(xì)胞損傷會(huì)激活DNA損傷耐受機(jī)制(DDT)途經(jīng)控制的PCNA的泛素化。
　　 本研究發(fā)現(xiàn):經(jīng)UV處理的HeLa細(xì)胞裂解液經(jīng)免疫親和層析柱和分子篩之后可以分離得到Polδ結(jié)合蛋白。令人感興趣的是，RNF8被鑒定出是Polδ結(jié)合蛋白并作為E3連接酶通過與UbcH5c E2酶作用介導(dǎo)小亞基p50的泛素化，同時(shí)通過熒光顯微鏡可以觀察到，經(jīng)UV處理的細(xì)胞中RNF8可以通過與Polδ的結(jié)合