表沒食子兒茶素沒食子酸酯對脂多糖誘導的小鼠巨噬細胞葡萄糖轉運體-1及糖酵解關鍵酶的影響.pdf

1、炎癥是一種免疫系統為中和病理狀態(tài)的正常生理反應，然而，失衡或者過長的炎癥反應將導致組織的進一步損傷，并且炎癥也與多種慢性疾病的發(fā)展有所聯系。在炎癥反應過程中，參與促炎反應的巨噬細胞是M1型，當巨噬細胞向M1型分化時，細胞發(fā)生一系列炎癥反應，包括NF-κB等信號通路的激活、多種促炎因子的分泌（IL-1β等）、ROS產物的生成以及細胞糖代謝的重編程。M1巨噬細胞發(fā)生代謝重編程，使得細胞TCA循環(huán)受抑制，糖氧酵解增強，并成為細胞能量的主要來源

2、，同時糖酵解所產生的中間代謝產物成為合成炎性因子的物質來源之一。
　　EGCG是綠茶中主要的多酚類物質，也是其中主要的活性物質，具有抗炎、抗病毒、抗腫瘤生成和抗氧化的活性，也具有抑制氧化對器官損傷的功能。EGCG在細胞表面表面受體為67 LR，通過67LR，EGCG可作用于細胞多種生理功能，包括細胞信號通路以及促炎因子的分泌等。
　　為探討EGCG對M1巨噬細胞葡萄糖攝取和糖酵解的影響，本實驗采用LPS誘導的小鼠巨噬細胞為炎

3、癥模型進行研究。細胞采用小鼠巨噬細胞RAW264.7細胞系和小鼠骨髓細胞，并將小鼠骨髓細胞誘導為小鼠骨髓細胞衍生的巨噬細胞(bone marrow derivedmacrophage，BMDM)。實驗選取巨噬細胞主要的葡萄糖轉運體1(Glucose transporter1，GLUT1)，糖酵解關鍵酶己糖激酶2(hexokinase2，HK2)、u型-2，6-二磷酸果糖激酶2(u-6-phosphofructo-2-kinase，u-P

4、FK2)和丙酮酸激酶(pyruvate kinase，Pkm)進行檢測。根據本課題組之前采用EGCG處理RAW264.7細胞炎癥相關研究，采用EGCG預處理2h，處理濃度為12.5μM，設立空白對照組、EGCG預處理組、LPS處理組和LPS+EGCG處理組，然后再用LPS(100ng/mL)處理24h后取材檢測。用實時熒光定量PCR檢測GLUT1、HK2、u-PFK2和Pkm的mRNA水平，葡萄糖濃度測定細胞培養(yǎng)液濃度，酶活測定檢測HK