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文檔簡介
1、1實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?br> 本實(shí)驗(yàn)通過觀察斜刺對一次急性離心運(yùn)動(dòng)骨骼肌損傷模型大鼠線粒體及胞漿中Ca2+含量、血清CK、骨骼肌組織中MPO和肌力的影響,探討針刺促進(jìn)骨骼肌損傷修復(fù)的作用機(jī)制。
2實(shí)驗(yàn)方法:
實(shí)驗(yàn)一:96只雄性Wista r大鼠隨機(jī)分為4組:安靜對照組(C,n=8)、運(yùn)動(dòng)組(E,n=40)、運(yùn)動(dòng)針刺組(EA,n=40)與運(yùn)動(dòng)針刺阻斷劑組(EAI,n=40)。采用-16°下坡跑90min建立一次性急性離心運(yùn)動(dòng)
2、模型。運(yùn)動(dòng)針刺組采用阿是穴斜刺干預(yù),運(yùn)動(dòng)針刺阻斷劑組采用針刺聯(lián)合GdCl3注射干預(yù),安靜組和運(yùn)動(dòng)組不干預(yù)。分別于運(yùn)動(dòng)后6 h、24 h、48 h、72 h、120 h對實(shí)驗(yàn)大鼠進(jìn)行股四頭肌(主要為股中間肌和股內(nèi)?。p傷部位取材,檢測骨骼肌線粒體中Ca2+含量;檢測骨骼肌肌肉組織中MPO、血清CK含量。
實(shí)驗(yàn)二:24只雄性Wista r大鼠隨機(jī)分成4組:安靜對照組(C,n=6)、電刺激組(E,n=6)、電刺激針刺組(EA,n=6
3、)、電刺激針刺阻斷劑組(EAI,n=6)。采用電刺激大鼠斜方肌建立過度離心運(yùn)動(dòng)損傷模型?;铙w大鼠暴露斜方肌,拉長后進(jìn)行電刺激,肌肉收縮(過程相當(dāng)于離心運(yùn)動(dòng))。電刺激采用,波寬700 ms;電壓8 V;頻率100 Hz;每次電刺激3 s,50次(即150s為一組);刺激一次后休息5 min,共測10組。
安靜組不進(jìn)行電刺激。電刺激組進(jìn)行電刺激;電刺激針刺組于刺激結(jié)束后進(jìn)行針刺(用直徑0.25 mm毫針刺斜方肌,留針4min);電
4、刺激針刺阻斷劑組于刺激結(jié)束后進(jìn)行針刺。所有組在刺激進(jìn)行試劑孵育并記錄肌張力變化。
取活體斜方肌拍攝肌肉組織 Ca2+熒光圖片,取離體斜方肌線粒體 Ca2+的測定。
3實(shí)驗(yàn)結(jié)果:
實(shí)驗(yàn)一
3.1不同組別大鼠血清中CK活性,與對照組相比,E組24 h有顯著增加,有極顯著性差異(P<0.001);48 h時(shí)有非常顯著性差異(P<0.01),120 h降至安靜組水平;EA組24h達(dá)到峰值,且有顯著性差異(
5、P<0.05),48 h至120h一直下降至安靜組水平;EAI組,6 h即有非常顯著性差異(P<0.01),24 h、48 h、120 h有極顯著性差異(P<0.001),120 h雖然下降,但高于E和EA組。每個(gè)時(shí)間點(diǎn),EA、EAI與運(yùn)動(dòng)組相比,24 h EA和48 h EA與其有顯著性差異(P<0.05),6 h EAI和48 h EAI與其有顯著性差異(P<0.05)。EAI與EA相比,在24 h有顯著性差異(P<0.05),在6
6、 h和120 h有非常顯著性差異(P<0.01),在48 h和72 h有極顯著性差異(P<0.001)。EA與EAI組在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上,除24 h有顯著性差異外(P<0.05),都有非常顯著性差異(P<0.01)。
3.2不同組別大鼠股中間肌髓過氧化物酶濃度,與對照組相比,6 h EAI、6 h E、24 h E、24 h EAI和72 h EAI有顯著性差異(P<0.05);48 h EAI有非常顯著性差異(P<0.01);6
7、 h EA有極顯著性差異(P<0.001)。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上,其他組與運(yùn)動(dòng)組相比,24 h EA和72 h EAI有顯著性差異(P<0.05);6 h EA和48 h EAI有非常顯著性差異(P<0.01)。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上,EA與EAI相比,在48 h有非常顯著性差異(P<0.01),在72 h有顯著性差異(P<0.05)。各組別在120 h基本恢復(fù)正常水平。
3.3不同組別大鼠股四頭肌線粒體中游離Ca2+,與對照組相比,24 h
8、EA和24 h EAI有顯著性差異(P<0.05);24 h EA和48 h EAI有非常顯著性差異(P<0.01);6 h EA有極顯著性差異(P<0.001)。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上,其他組與運(yùn)動(dòng)組相比,48 h EAI有顯著性差異(P<0.05);6 h EA有極顯著性差異(P<0.001)。每個(gè)時(shí)間點(diǎn)上,EA與EAI相比,在6 h有非常顯著性差異(P<0.01),在48 h有顯著性差異(P<0.05)。各組別呈先上升后下降趨勢,在120
9、h基本恢復(fù)正常水平,但是其峰值出現(xiàn)的時(shí)間E、EA、EAI分別出現(xiàn)在24 h、6 h和48 h,且峰值大小為EA>E>EAI。
實(shí)驗(yàn)二
3.1鈣離子熒光圖片顯示,對照組(C)中,肌纖維熒光強(qiáng)度較弱,肌纖維在灰度圖像下不明顯,胞漿中無明顯熒光。電刺激組(E),肌纖維明顯,且胞漿中熒光很強(qiáng),可視區(qū)域內(nèi)大部分肌纖維很多具有較強(qiáng)熒光,且有零星熒光亮點(diǎn)。電刺激針刺組(EA),大部分肌纖維熒光強(qiáng)度降低,且熒光亮點(diǎn)很多。運(yùn)動(dòng)針刺加阻
10、斷劑組( EA I),肌纖維明顯,單根肌纖維熒光較強(qiáng)。熒光圖片平均灰度值顯示,不同組別大鼠斜方肌胞漿中游離鈣離子濃度,與對照組相比,E有極顯著性差異(P<0.001);與E相比,EA與 EAI有非常顯著性差異(P<0.01)。
3.2大鼠斜方肌線粒體中游離鈣離子濃度,與對照組相比 EA有非常顯著性差異(P<0.01);與 E相比,EA有非常顯著性差異(P<0.01);與 EA相比,EAI有非常顯著性差異(P<0.01)。
11、> 3.3大鼠斜方肌肌張力,與對照組相比,電刺激90 min后,E、EAE、AI均有非常顯著性差異(P<0.01);100 min時(shí)E、EAI有顯著性差異(P<0.05)。100 min時(shí),與E相比,EA有顯著性差異(P<0.05);與EA相比,EAI有顯著性差異(P<0.05)。
4結(jié)論:
4.1離心收縮運(yùn)動(dòng)引起骨骼肌胞漿Ca2+的升高,血清CK活性升高,中性粒細(xì)胞產(chǎn)物MPO活性升高。
4.2針刺可有效
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