siRNA介導(dǎo)的NK細(xì)胞KIR2DL3受體抑制對(duì)人肝星狀細(xì)胞的影響分析.pdf

1、目的：
　　通過特異性沉默NK細(xì)胞KIR2DL3受體表達(dá)，分析抑制性受體KIR2DL3與NK細(xì)胞活性相關(guān)性；沉默后NK細(xì)胞與人HSCs細(xì)胞系LX-2細(xì)胞株共同培養(yǎng)，分析抑制KIR2DL3受體的表達(dá)后，NK細(xì)胞對(duì)活化的人HSCs凋亡的影響是否發(fā)生改變。以期深入認(rèn)識(shí)N K細(xì)胞抑制慢性HC V感染者肝纖維化的分子機(jī)制。
　　方法：
　　取隨機(jī)抽取的48例健康漢族人及10例慢性HCV感染患者外周血樣本，進(jìn)行NK細(xì)胞分離，鑒定N

2、K細(xì)胞KIR2DL2及KIR2DL3基因型，分析并分選出攜帶KIR2DL3基因的樣本個(gè)體。利用RNAi技術(shù),將ShRNA片段插入PLKO.1載體中，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將包裝質(zhì)粒共同轉(zhuǎn)染到293T細(xì)胞，收集上清中的慢病毒，將慢病毒與 NK細(xì)胞共同孵育，以特異性 siRNA沉默 KIR2DL3的基因表達(dá)。siRNA轉(zhuǎn)染后的NK細(xì)胞與人HSCs細(xì)胞系LX-2細(xì)胞株共同培養(yǎng)，分析特異性siRNA沉默KIR2DL3基因，抑制KIR2DL3受體的表達(dá)后

3、，NK細(xì)胞對(duì)活化的人HSCs凋亡的影響是否發(fā)生改變，分析NK細(xì)胞的抗肝纖維化作用的分子機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　我們發(fā)現(xiàn)58例樣本中，KIR2DL3、KIR2DL2等位基因以KIR2DL3-2DL3純合子形式為常見，KIR2DL3基因型占總樣本量的96.6％。此外，我們分析運(yùn)用RNA干擾技術(shù)可實(shí)現(xiàn)對(duì)KIR2DL3基因的沉默。以siRNA轉(zhuǎn)染后的NK細(xì)胞與人HSCs細(xì)胞系LX-2細(xì)胞株共同培養(yǎng)，檢測 LX-2細(xì)胞凋亡情況。我們發(fā)