砷對(duì)小鼠Y染色體Sxrb區(qū)Ddx3y基因表達(dá)的影響.pdf

1、背景：砷是地球環(huán)境毒物中的主要物質(zhì)之一，具有較強(qiáng)的雄性生殖毒性，流行病學(xué)和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究均表明長(zhǎng)期接觸砷可影響精子的形成和發(fā)育，損害生殖功能。然而，砷對(duì)雄性生殖系統(tǒng)毒作用的機(jī)制并不十分清楚，尤其砷介導(dǎo)Y染色體精子發(fā)生、發(fā)育相關(guān)基因而影響雄性生殖系統(tǒng)功能的研究尚未見報(bào)道。
　　 目的：通過觀察亞慢性砷暴露對(duì)小鼠精子發(fā)生、發(fā)育的毒作用以及對(duì)睪丸、附睪組織Ddx3y基因mRNA及蛋白表達(dá)的影響，探討其內(nèi)在聯(lián)系，為闡明砷的雄性生殖毒作用機(jī)

2、制提供新的靶標(biāo)依據(jù)。
　　 方法：SPF級(jí)雄性小鼠48只，按體重將小鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、1 mg/kg、2 mg/kg和4 mg/kg As2O3處理組，每組12只。通過自然飲用含不同濃度As2O3雙蒸水的方式使小鼠染砷(對(duì)照組僅飲用雙蒸水)。連續(xù)染毒60天，每組3只小鼠進(jìn)行灌流后取睪丸和附睪組織置4％中性甲醛溶液中固定。每組9只小鼠稱重后頸椎脫臼處死，取出睪丸和附睪組織稱重。其中5只小鼠的單側(cè)附睪被迅速分離做精子涂片后鏡檢觀察小

3、鼠精子活動(dòng)度及形態(tài)。其余組織迅速置液氮冷凍并于-80℃冰箱中保存。用Real-Time PCR技術(shù)檢測(cè)Ddx3y基因的mRNA表達(dá)，用Western blotting和免疫組化方法檢測(cè)Ddx3y蛋白的表達(dá)及組織內(nèi)分布情況。
　　 結(jié)果：與對(duì)照組比較，染砷組小鼠睪丸組織生精上皮第Ⅶ階段各級(jí)細(xì)胞數(shù)量減少，睪丸和附睪臟器系數(shù)、精子活動(dòng)度降低，精子畸形率增加。Real-Time PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，染砷組小鼠睪丸、附睪中Ddx3y基因表

4、達(dá)顯著低于對(duì)照組，且有劑量反應(yīng)關(guān)系。Western blotting檢測(cè)結(jié)果顯示，染砷組的睪丸和附睪中的Ddx3y蛋白表達(dá)降低，以4 mg/kg劑量組差異顯著，且呈劑量反應(yīng)關(guān)系。免疫組化觀察可見，對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組Ddx3y蛋白在睪丸生精上皮各個(gè)階段均有分布，尤其主要分布在生精周期的精原細(xì)胞和初級(jí)精母細(xì)胞中，染砷組睪丸的Ddx3y蛋白免疫反應(yīng)強(qiáng)度低于對(duì)照組，以4 mg/kg劑量組差異最明顯，各組支持細(xì)胞中未見此蛋白表達(dá)；附睪中可見Ddx3y