周期性動態(tài)壓縮應(yīng)力對海藻酸鈉立體培養(yǎng)敲減SOX9基因骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨分化的實驗研究.pdf

1、目的：
　　觀察周期性動態(tài)壓縮應(yīng)力對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨分化的作用，同時對比分析力學(xué)因素對敲減SOX9基因骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨分化過程中的作用，探討力學(xué)因素與SOX9在軟骨分化過程中的重要作用。
　　方法：
　　取4周齡昆明小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（C），體外培養(yǎng)至第三代，流式細(xì)胞儀鑒定細(xì)胞表型確定為干細(xì)胞，將構(gòu)建的小鼠SOX9基因干擾的慢病毒載體體外轉(zhuǎn)染小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，構(gòu)建SOX9敲減的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（siC）。

2、分別將C細(xì)胞和siC細(xì)胞以1x107/ml的密度與2％海藻酸鈉凝膠混勻，制成圓柱形載體。根據(jù)實驗過程中對載體的處理因素的不同將試驗分為8組：各組在試驗的前7天均給予軟骨誘導(dǎo)液處理。A組：C細(xì)胞加力未誘導(dǎo)組：在軟骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)7天后再給予7天的加力未誘導(dǎo)處理；B組：C細(xì)胞加力誘導(dǎo)組：在軟骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)7天后再給予7天的加力誘導(dǎo)處理；C組：誘導(dǎo)不加力組：在軟骨誘導(dǎo)液誘導(dǎo)7天后再給予7天的誘導(dǎo)不加力處理；D組：siC細(xì)胞加力未誘導(dǎo)組；E組：siC

3、細(xì)胞加力誘導(dǎo)組；F組：siC細(xì)胞誘導(dǎo)不加力組；D、E、F組的處理分別同A、B、C組。G、H組為分別為C細(xì)胞、siC細(xì)胞未加力、未誘導(dǎo)的對照組：誘導(dǎo)7天后予以普通培養(yǎng)液培養(yǎng)；實驗采用Flexcell-5000基底加載系統(tǒng)對細(xì)胞盤施加正弦波、0.5HZ、20Kpa、2h/d壓縮應(yīng)力。在相關(guān)處理后采用RT-PCR分析SOX9、ROCK1及COL-Ⅱ的表達(dá)。應(yīng)用免疫熒光技術(shù)對各組處理前后的COL-Ⅱ表達(dá)進(jìn)行監(jiān)測。
　　結(jié)果：
　　R

4、T-PCR檢測：SOX9及COL-ⅡmRNA表達(dá)：B組高于C組及A組， C組較G組表達(dá)高，E組高于F組及D組，D組高于H組（P<0.05）。A組與G組表達(dá)相當(dāng)，B組及E組表達(dá)無顯著差異（P>0.05）、ROCK1mRNA：E組高于B組（P<0.05）。免疫熒光檢測顯示B組及E組均有二型膠原免疫熒光表達(dá)。
　　結(jié)論：
　　周期性動態(tài)壓縮應(yīng)力可以促進(jìn)間充質(zhì)干細(xì)胞的軟骨分化。周期性動態(tài)力學(xué)加載可以增加敲減SOX9基因骨髓間充質(zhì)干細(xì)