廣西豬增生性腸炎病原的初步研究.pdf

1、豬增生性腸炎(PPE)是由胞內(nèi)勞森氏菌(Lawsonia Intracellularis,LI)引起的接觸性傳染病，是一種具有重要經(jīng)濟(jì)意義的世界性疾病。該病呈全球性流行，國(guó)內(nèi)臨床可疑病例有增多趨勢(shì)，豬群感染率高。胞內(nèi)勞森氏菌宿主廣泛，是豬腸道疾病綜合征(PEDC)的關(guān)鍵性病原之一，對(duì)全球養(yǎng)豬業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。因此，了解PPE的流行情況并研究其病原，對(duì)防制該病和促進(jìn)養(yǎng)豬業(yè)的健康發(fā)展具有重要意義。 本研究?jī)?yōu)化了豬增生性腸炎的PCR

2、診斷方法，能用于活體檢測(cè)。從疑似病變的豬回腸中擴(kuò)增出胞內(nèi)勞森氏菌的基因，與GenBank上各株胞內(nèi)勞森氏菌核苷酸同源性在98.9％-100％之間，證實(shí)廣西豬群存在豬胞內(nèi)勞森氏菌的感染；對(duì)廣西豬群增生性腸炎調(diào)查顯示，屠宰豬和斷奶仔豬平均感染率分別為15.6％和13.5％，應(yīng)引起重視。 以感染豬回腸粘膜為材料，成功將本研究所得的GXNN株胞內(nèi)勞森氏菌接種到兔體。動(dòng)物感染試驗(yàn)表明，豬源胞內(nèi)勞森氏菌可以用兔體接種保存，該菌可以人工感染小

3、鼠；GXNN株胞內(nèi)勞森氏菌對(duì)兔子和小鼠致病性相似，初步建立其動(dòng)物感染模型。將GXNN株胞內(nèi)勞森氏菌接種到豬后能復(fù)制出PPE，表明該菌是PPE的病原。對(duì)人工感染豬組織進(jìn)行HE切片染色，證實(shí)胞內(nèi)勞森氏菌可以引起豬回腸、結(jié)腸腺窩上皮細(xì)胞的增生。 設(shè)計(jì)特異性引物，克隆GXNN株胞內(nèi)勞森氏菌的16SrRNA基因。核苷酸同源性分析顯示，GXNN株與不同動(dòng)物源性胞內(nèi)勞森氏菌16SrRNA核苷酸同源性在98.4％～100％；與其他種類原核微生物

4、16SrRNA核苷酸同源性在71.8％～88.6％。 克隆GXNN株胞內(nèi)勞森氏菌的三個(gè)外膜蛋白基因和一個(gè)表面脂蛋白基因(LI1022，LI1024，LI0902，LI0235)，與己發(fā)表菌株AM180252核苷酸同源性分別為99.8％，99.5％，99.8％，99.8％；氨基酸同源性分別為99.4％，98.8％，99.3％，98.9％。分別將四個(gè)基因連接至PET32a+載體并轉(zhuǎn)化至BL21，經(jīng)酶切鑒定和序列測(cè)定后表明插入位置正確