黃芪白芍協(xié)同調(diào)控細(xì)胞抗氧化作用機制的研究.pdf

1、近年來，活性氧和自由基成為現(xiàn)代生命科學(xué)研究的前沿和熱點，評價和篩選具有抗氧化活性的天然資源也成為生物學(xué)、醫(yī)學(xué)和食品科學(xué)研究的新趨勢。我國中藥資源豐富，是天然抗氧化物質(zhì)的重要來源，已引起國內(nèi)外研究者的廣泛重視。研究發(fā)現(xiàn)黃芪、白芍具有良好的抗氧化特性，且二者配伍具有協(xié)同作用。
　　本課題組前期采用 HPLC-DPP H和 HP LC-DAD-MS/MS等方法從黃芪、白芍中篩選出七種具有協(xié)同抗氧化效果的成分，分別為：黃芪中的槲皮素、毛蕊

2、異黃酮-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、芒柄花素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、9,10-二甲氧基紫檀烷-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、2’-羥基-3’,4’-二甲氧基異黃烷-7-O-β-D-葡萄糖苷和白芍中的兒茶素、羥基芍藥苷。因此，本研究主要內(nèi)容如下：
　　1.測定了槲皮素、兒茶素、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、羥基芍藥苷單一成分及兩兩組合對 DPPH和 ABTS自由基的清除能力。研究發(fā)現(xiàn)，槲皮素和兒茶素清除DPPH和ABTS自

3、由基能力較強，糖苷類物質(zhì)毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、羥基芍藥苷清除自由基能力較弱；槲皮素和兒茶素在12.5μM濃度、1:1配比條件下呈現(xiàn)出較好的協(xié)同效應(yīng)；槲皮素、兒茶素分別與毛蕊異黃酮葡萄糖苷、芒柄花苷、羥基芍藥苷組合也表現(xiàn)出顯著的協(xié)同增效作用。
　　2.研究了所選成分的細(xì)胞抗氧化作用。采用MTT實驗分析了槲皮素、兒茶素、毛蕊異黃酮、毛蕊異黃酮葡萄糖苷、羥基芍藥苷的細(xì)胞毒性。通過細(xì)胞抗氧化能力測定試驗，分析了所選成分的劑量效應(yīng)、

4、時間效應(yīng)和 CI值，最終篩選出槲皮素12.5μM與兒茶素12.5μM的濃度組合做進(jìn)一步的研究。經(jīng)過 H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激模型驗證，發(fā)現(xiàn)槲皮素兒茶素具有協(xié)同保護(hù)細(xì)胞抗氧化的作用。
　　3.進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，槲皮素、兒茶素協(xié)同抗氧化的作用機理可能與細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶的活性表達(dá)有關(guān)，因此分別采用A BAP和 H2 O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激模型，分析了兩者組合對 SOD、GPx、CAT等抗氧化酶的活性以及 MDA含量的影響。結(jié)果表明，槲皮素

5、和兒茶素通過協(xié)同調(diào)控細(xì)胞中 SOD、GPx、CAT等抗氧化酶的活性表現(xiàn)出抗氧化作用。
　　4.為了進(jìn)一步探究槲皮素和兒茶素協(xié)同調(diào)控細(xì)胞抗氧化作用的分子機制，采用H2 O2誘導(dǎo)的細(xì)胞氧化應(yīng)激模型，分別用槲皮素、兒茶素及聯(lián)用組合分別處理細(xì)胞后提取總 RNA用于 RNA-seq轉(zhuǎn)錄組測序分析。通過 RNA-seq分析表達(dá)差異顯著的基因發(fā)現(xiàn)，槲皮素與兒茶素聯(lián)用可以協(xié)同調(diào)控細(xì)胞內(nèi)抗氧化酶基因的表達(dá)，包括：SOD1、GPX2、PRX1、PRX