蠶絲蛋白肽抗腫瘤與抗氧化作用研究.pdf

1、蠶絲主要由絲素蛋白和絲膠蛋白組成，其中絲素蛋白是蠶絲蛋白中的主要組成部分，約占蛋白總量的70％。通過(guò)水解法或酶降解等方法，可將蠶絲蛋白降解成中低分子量的絲蛋白及其多肽。近幾年來(lái)，蠶絲蛋白被廣泛應(yīng)用于保健食品、化妝品以及生物醫(yī)用材料和生物醫(yī)藥等非紡織領(lǐng)域，并取得了很大的研究成果?；诖?，為了更好地開發(fā)絲蛋白的醫(yī)用功能，論文將探索蠶絲蛋白肽在抗腫瘤和抗氧化作用上的潛在藥用功能，以期為尋找抗腫瘤和抗氧化的治療藥物提供一種新的天然活性物質(zhì)。

2、r>　　 論文首先通過(guò)文獻(xiàn)調(diào)研，確定了絲蛋白肽的水解提取工藝與主要分子量范圍；隨后基于實(shí)驗(yàn)室提取的絲蛋白肽，研究了絲蛋白肽對(duì)于人胰腺癌細(xì)胞株SW1990生長(zhǎng)和凋亡的影響、對(duì)人胰腺癌SW1990多細(xì)胞腫瘤球體生長(zhǎng)的影響，并建立了裸鼠腫瘤模型，以此研究絲蛋白肽對(duì)人胰腺癌荷瘤裸鼠的抗腫瘤作用。此外，活性氧自由基誘導(dǎo)的氧化損傷是某些疾病與衰老的重要原因，如心腦血管病和腫瘤。當(dāng)對(duì)這些疾病施加預(yù)防和治療措施時(shí)皆可考慮采用適當(dāng)?shù)那宄杂苫乃幬锘蛲?/p>

3、過(guò)自由基機(jī)制進(jìn)行調(diào)節(jié)和抑制?；诖?，論文進(jìn)一步根據(jù)《保健食品檢驗(yàn)與評(píng)價(jià)技術(shù)規(guī)范》(2003版)“保健食品功能學(xué)評(píng)價(jià)程序與檢驗(yàn)方法分析”，從抑制過(guò)氧化反應(yīng)的機(jī)理出發(fā)，探討了蠶絲蛋白肽對(duì)肝損傷小鼠的抗氧化功能。具體研究結(jié)果如下：
　　 1、實(shí)驗(yàn)使用乙醇與氯化鈣水溶液降解脫膠絲素，用透析法進(jìn)行除鹽濃縮，并用質(zhì)譜和氨基酸分析法對(duì)絲素進(jìn)行理化性質(zhì)的測(cè)定。結(jié)果表明，實(shí)驗(yàn)制備得到了一種低分子量但分布范圍廣泛的絲蛋白肽混合溶液，其主要分子量集中

4、在8kD～10kD。該混合肽中主要氨基酸有甘氨酸、胱氨酸、丙氨酸和絲氨酸，占氨基酸總量的79.0%，其中甘氨酸含量高達(dá)30.45%。
　　 2、通過(guò)使用低、中、高3個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)濃度的絲蛋白肽培養(yǎng)液，在體外對(duì)人胰腺癌SW1990細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，并從細(xì)胞形態(tài)和細(xì)胞增殖兩方面，探索了絲蛋白肽對(duì)人胰腺癌SW1990細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果表明，絲蛋白肽能有效抑制SW1990細(xì)胞的生長(zhǎng)，隨著絲蛋白肽質(zhì)量分?jǐn)?shù)的提高，抑制作用愈加明顯；絲蛋白肽對(duì)

5、SW1990細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，體現(xiàn)在能有效抑制SW1990細(xì)胞的增殖，并能破壞胰腺癌細(xì)胞的微絲結(jié)構(gòu)，從而促進(jìn)癌細(xì)胞的凋亡。
　　 3、采用搖床培養(yǎng)法，將胰腺癌SW1990細(xì)胞培養(yǎng)成多細(xì)胞腫瘤球(MTS)，并在形態(tài)學(xué)和定量分析MTS的直徑增長(zhǎng)兩方面探索了SW1990MTS成型過(guò)程和生長(zhǎng)變化；實(shí)驗(yàn)使用低、中、高3個(gè)質(zhì)量分?jǐn)?shù)濃度的蠶絲蛋白肽培養(yǎng)液作用于MTS，從形態(tài)學(xué)和MTS直徑增長(zhǎng)兩方面，探索了蠶絲蛋白肽對(duì)SW1990多細(xì)胞腫瘤球

6、成型和生長(zhǎng)的抑制作用。結(jié)果表明，絲蛋白肽對(duì)胰腺癌SW1990多細(xì)胞腫瘤球的成型和生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，并且隨著絲蛋白肽質(zhì)量分?jǐn)?shù)的增加，其抑制作用愈加明顯。
　　 4、實(shí)驗(yàn)采用在裸鼠背部皮下注射SW1900細(xì)胞的方法，建立胰腺癌裸鼠皮下移植瘤模型。分別以腹腔注射生理鹽水、吉西他濱為陰性和陽(yáng)性對(duì)照，以蠶絲蛋白肽低、中、高3個(gè)劑量組和蠶絲蛋白肽聯(lián)合吉西他濱用藥組，為4個(gè)實(shí)驗(yàn)組。從裸鼠體重、移植瘤體積變化、抑瘤率、腫瘤指數(shù)等指標(biāo)，初步

7、探索了蠶絲蛋白肽對(duì)胰腺癌模型小鼠皮下移植瘤生長(zhǎng)的影響作用。結(jié)果表明，與陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照相比，含有絲蛋白肽的實(shí)驗(yàn)組對(duì)人胰腺癌裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用。
　　 5、實(shí)驗(yàn)每天給4組小鼠分別灌胃注射低、中、高質(zhì)量分?jǐn)?shù)濃度的蠶絲蛋白肽和生理鹽水，連續(xù)30天，15只/組；在第31天，采用注射溴代苯的方法誘導(dǎo)建立過(guò)氧化肝組織損傷小鼠模型，最后通過(guò)測(cè)試模型小鼠肝組織和血中的脂質(zhì)過(guò)氧化物含量和過(guò)氧化物酶(超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過(guò)