混合DNA分析中混合比例推斷的研究.pdf

1、中文摘要混合DM分析中混合比例推斷的研究摘要目的：混合DNA分析是法醫(yī)學(xué)中一個具有挑戰(zhàn)性的難題。由于混合DNA中各種組分難以分離，混合DNA的基因分型結(jié)果表現(xiàn)為各組分的等位基因相互并存、相互重疊的現(xiàn)象，導(dǎo)致結(jié)果的分析異常復(fù)雜。對于法醫(yī)實踐中常見的混合DNA的短串聯(lián)重復(fù)序列(shorttandemrepeats，STR)分型圖譜，首先判斷是否為混合DNA，其次判斷是幾個個體混合，然后推斷各組分的混合比例，在此基礎(chǔ)上，進一步推斷各成分可能的

2、基因型。混合比例推斷的正確與否直接影響各組分基因型的推斷結(jié)果，因此，混合比例推斷是混合DNA分析中的一個關(guān)鍵問題。本課題擬從兩方面研究影響混合DNA分析中混合比例推斷的因素：1)QuantifilerDuoQuantification試劑盒初始DNA定量結(jié)果，2)Identifiler試劑盒基因分型圖譜中各等位基因的峰型信息，旨在為準(zhǔn)確推斷混合比例提供有價值的指導(dǎo)和建議。方法：1單一樣本雜合型均衡比(Heterozygotebalanc

3、e，Hb)的評估：按照知情同意原則，采集180份健康無關(guān)個體靜脈血5ml。用QIAampDNABloodMidi試劑盒提取全血基因組DNA，并用AmpFLSTR@Identifiler試劑盒進行PCR擴增，用ABI3130GeneticAnalyzer對PCR產(chǎn)物進行電泳分型，使用GeneMapperTMv32分析結(jié)果。另外，隨機選擇本實驗室2012年使用本儀器獲得的120個案件樣本的STR分型圖譜，計算上述300個樣本每個基因座的雜合

4、型均衡比。2混合DNA模型制備：取女性標(biāo)準(zhǔn)品DNA9947A和男性標(biāo)準(zhǔn)品DNA2800M，另隨機選取一個男性DNA樣本和一個女性DNA樣本(分別命名為M、F)，用QuantifilerDuoDNAQuantification試劑盒對4個DNA樣本進行定量。根據(jù)定量結(jié)果，將9947A、2800M稀釋為O5ng／lxl，樣本M、F稀釋為lng／tl。將2800M和9947A、M和F進行混合，混合比率(mixtureratio，Mr)為：1：