β-環(huán)糊精樹枝分子的合成及免疫佐劑效果分析.pdf

1、疫苗對(duì)傳染病、烈性疾病的治療和預(yù)防具有重要意義。新型亞單位疫苗，不含有病毒的基因組，較減毒活疫苗安全，但免疫原性很弱，需要在使用時(shí)加入一定量的疫苗佐劑，來提高免疫效果。因此本論文合成了基于β-環(huán)糊精的樹枝狀大分子，研究其作為佐劑的免疫學(xué)性質(zhì)和安全性。
　　首先β-環(huán)糊精（β-CD）和甲基丙烯酸酐（MA）反應(yīng)，合成甲基丙烯酸酐酰化的β-環(huán)糊精（β-CDMA），產(chǎn)率為70%；其次甲基丙烯酸酐和甲基丙烯酸羥乙酯反應(yīng)，合成單體乙二醇二甲基

2、丙烯酸酯，產(chǎn)率為71%；以β-CDMA為樹枝狀大分子的核，通過點(diǎn)擊化學(xué)和邁克爾加成反應(yīng)，使乙二醇二甲基丙烯酸酯單體與半胱胺交替反應(yīng)，合成G1、G2、G3代樹枝狀大分子，產(chǎn)率分別為84%、80%、90%。1H NMR結(jié)果表明產(chǎn)物結(jié)構(gòu)正確；凝膠滲透色譜結(jié)果表明β-CDMA的聚合物分散性指數(shù)（polymer dispersity index，簡(jiǎn)稱PDI）值為1.1，接近單分布，純度較高。對(duì)于G1、G2、G3代樹枝狀大分子，隨著樹枝狀大分子代數(shù)

3、的增加，分子量增加，且PDI值均小于1.1，表明合成的樹枝狀大分子接近單分布，純度較高。
　　以常規(guī)鋁佐劑為對(duì)照，考察不同劑量的G3樹枝狀大分子對(duì)風(fēng)疹亞單位疫苗體液免疫應(yīng)答和細(xì)胞免疫應(yīng)答的增強(qiáng)效果。間接ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著G3樹枝狀大分子劑量的增加，抗血清滴度增加；對(duì)同一劑量，不同血清稀釋度下G3樹枝狀大分子組和鋁佐劑組的OD值進(jìn)行比較，其中當(dāng)佐劑的使用劑量為100μg，血清稀釋度為1:160，1:320時(shí)，G3樹枝狀大分

4、子組的OD值比鋁佐劑組的OD值高，差異極顯著。因此表明G3樹枝狀大分子作為佐劑可以提高小鼠血清中特異性的抗體滴度，而且在G3樹枝狀大分子的免疫劑量為100μg時(shí)，體液免疫效果最好。夾心ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，當(dāng)G3樹枝狀大分子的使用劑量為100μg時(shí)，產(chǎn)生的IFN-γ、IL-2的濃度比同劑量鋁佐劑組產(chǎn)生的IFN-γ、IL-2的濃度高，差異顯著，因此表明當(dāng)G3樹枝狀大分子的免疫劑量為100μg時(shí)，作為佐劑可以提高風(fēng)疹亞單位疫苗的細(xì)胞免疫應(yīng)