JBP485與頭孢氨芐相互作用的藥代動(dòng)力學(xué)研究.pdf

1、目的:JBP485(cyclo-trans-4-L-hydroxyprolyl-L-serine;環(huán)狀—反式—4—左旋—羥脯氨酸—左旋絲氨酸)是一種二肽(dipeptide),從日本抗肝炎藥物L(fēng)aennec(人胎盤水解物)中分離,對自身免疫性肝損傷有一定治療作用。頭孢氨芐(cephalexin)為第一代口服頭孢菌素,主要用于敏感菌引起的尿路、呼吸道及皮膚軟組織等輕度感染。本文旨在闡明口服抗肝炎化學(xué)合成二肽JBP485與頭孢氨芐聯(lián)合用藥的

2、藥代動(dòng)力學(xué)特征及相互作用機(jī)制。
　　 方法:建立靈敏、快速、高效的LC-MS/MS內(nèi)標(biāo)法檢測大鼠生物樣品及細(xì)胞裂解液中JBP485與頭孢氨芐的濃度及含量。(1)體內(nèi)口服吸收實(shí)驗(yàn):將大鼠乙醚麻醉后采取以下分組給藥:單獨(dú)給與JBP48525mg/kg:單獨(dú)給與頭孢氨芐50 mg/kg;同時(shí)給與JBP48525 mg/kg和頭孢氨芐50 mg/kg。灌胃后于設(shè)定時(shí)間點(diǎn)頸靜脈取血,測定二者的血藥濃度。(2)離體翻轉(zhuǎn)腸實(shí)驗(yàn):0.5 mM

3、JBP485與1mM頭孢氨芐單獨(dú)或同時(shí)加入外翻腸囊模型,考察兩種藥物從粘膜側(cè)到漿膜側(cè)攝取的相互影響,并使用20 mM Gly-sar(甘氨酰肌氨酸,典型的二肽底物)及1mM JBP923(JBP485的衍生物)分別與0.5 mM JBP485同時(shí)聯(lián)用,考察二者對其腸道攝取的影響。(3)原位單向空腸灌流實(shí)驗(yàn):0.5 mM JBP485與1mM頭孢氨芐單獨(dú)或同時(shí)灌流大鼠空腸腸段,門靜脈取血考察兩種藥物經(jīng)空腸吸收的相互影響,同時(shí)也考察了Gly

4、-sar及JBP923對JBP485經(jīng)小腸吸收的影響。(4)體內(nèi)腎排泄實(shí)驗(yàn):以與口服給藥同樣分組方式及相同劑量頸靜脈給藥后于各時(shí)間點(diǎn)收集血漿樣品及尿液,考察血藥濃度、尿液中經(jīng)時(shí)累積藥物排泄量及腎清除率的變化情況,并考察OATs的典型底物丙磺舒對JBP485腎排泄的影響。(5)離體腎切片實(shí)驗(yàn):0.5 mM JBP485與1mM頭孢氨芐同時(shí)加入腎切片攝取液中考察二者相互抑制情況,并通過JBP485聯(lián)合應(yīng)用Gly-sar、PAH及PCG等進(jìn)一

5、步闡明其排泄機(jī)制。
　　 (6)轉(zhuǎn)染細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn):將于24孔板培養(yǎng)3天的單轉(zhuǎn)染hOAT1-或hOAT3-HEK293細(xì)胞及vector-HEK293細(xì)胞用于藥物攝取實(shí)驗(yàn),考察JBP485與頭孢氨芐相互作用機(jī)制及特異性底物對JBP485經(jīng)hOAT1-或hOAT3-HEK細(xì)胞攝取的抑制作用。
　　 結(jié)果:(1)口服吸收實(shí)驗(yàn)中,聯(lián)合用藥后JBP485與頭孢氨芐的胃腸道吸收均明顯減少;(2)離體翻轉(zhuǎn)腸中兩藥聯(lián)用后漿膜側(cè)的藥物濃度

6、均顯著下降,且Gly-sar及JBP923均可抑制JBP485經(jīng)離體腸段的攝取;
　　 (3)兩種藥物同時(shí)經(jīng)空腸灌流后,其門脈血藥濃度均顯著減小,Gly-sar及JBP923也可明顯抑制JBP485的腸道吸收;(4)靜脈聯(lián)用后二者的血藥濃度與對照組相比均無明顯變化,但腎臟清除率顯著降低(JBP485從2.89 m1·min-1·kg-1降低為1.87 ml·min-1·kg-1,頭孢氨芐從2.23m1·min-1.kg-1降低為

7、1.58 ml·min-1·kg-1)。丙磺舒可以顯著抑制JBP485及頭孢氨芐的腎排泄:(5)腎切片實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,聯(lián)合用藥后JBP485與頭孢氨芐可相互抑制彼此經(jīng)腎切片的攝取。OAT1的特異性底物對氨基馬尿酸(PAH),OAT3的特異性底物青霉素G(PCG)及PEPT2的特異性底物Gly-sat均能顯著抑制腎切片對JBP485的攝取,提示JBP485與頭孢氨芐均為腎臟OATs及PEPT2等轉(zhuǎn)運(yùn)體的底物:(6)單轉(zhuǎn)染OAT1或OAT3的

8、HEK293細(xì)胞對JBP485存在明顯的可飽和攝取過程,并且該攝取可以分別被OAT1的特異性底物PAH及OAT3的特異性底物PCG所抑制;JBP485與頭孢氨芐可相互抑制對方在該轉(zhuǎn)染細(xì)胞的攝取,由此證實(shí)JBP485與頭孢氨芐是OATs的底物。
　　 結(jié)論:JBP485與頭孢氨芐聯(lián)合用藥后可發(fā)生明顯的藥物相互作用,二者聯(lián)合用藥后的作用靶點(diǎn)在小腸和腎臟。二者口服聯(lián)用后相互競爭腸道PEPTl而使彼此的吸收減少；二者靜脈聯(lián)合用藥后相互競