基于藥物代謝動力學(xué)的橙汁與異煙肼相互作用研究.pdf

1、目的：基于藥物代謝動力學(xué)方法，探討橙汁與抗結(jié)核藥異煙肼之間的食物-藥物相互作用。
　　方法：1.采用HPLC與LC-MC系統(tǒng)，建立大鼠血漿和肝組織中異煙肼及其代謝產(chǎn)物乙酰異煙肼、異煙酸濃度的檢測方法。2. SPF級雄性SD大鼠30只，隨機分為異煙肼組和橙汁+異煙肼組。異煙肼組給予異煙肼90 mg/kg后，分別于10、20、30、45、60、75、90、120、150、180 min，經(jīng)心尖取血0.2 mL；橙汁+異煙肼組給予異煙肼

2、90 mg/kg后30 min給予橙汁20 mL/kg，分別于給予異煙肼后45、60、75、90、120、150、180 min，經(jīng)心尖取血。樣品通過HPLC分析，繪制異煙肼血漿藥物濃度-時間曲線。3. SPF級雄性SD大鼠60只隨機分為4組：空白組、橙汁組、橙汁+異煙肼組、異煙肼組。橙汁組每日于09:00和15:00給予橙汁；橙汁+異煙肼組每日于09:00給予異煙肼和橙汁，15:00給予橙汁；異煙肼組每日于09:00給予異煙肼；空白組

3、給予相同體積蒸餾水，連續(xù)給藥30天，異煙肼劑量30 mg/kg，橙汁劑量20 mL/kg。最后一天給予一次異煙肼90 mg/kg，分別于10、20、30、45、60、75、90、120、150、180、210 min，經(jīng)心尖取血0.2 mL；采用LC-MS方法監(jiān)測各組異煙肼及其代謝產(chǎn)物乙酰異煙肼與異煙酸的血藥濃度。通過RT-PCR方法，檢測各組十二指腸與腎臟樣本中轉(zhuǎn)運體mRNA的表達，通過Western-blot方法，檢測各組肝臟樣本中

4、異煙肼代謝相關(guān)蛋白的表達。4. SPF級雄性SD大鼠30只隨機分為4組：空白組、橙汁組、橙汁+異煙肼組、異煙肼組：橙汁組每日于09:00給予橙汁；橙汁+異煙肼組每日于09:00給予異煙肼，15:00給予橙汁；異煙肼組每日于09:00給予異煙肼；空白組給予相同體積蒸餾水，連續(xù)給予60、180天，異煙肼劑量30 mg/kg，橙汁劑量20 mL/kg。最后一天給予一次異煙肼90 mg/kg，分別于10、20、30、45、60、75、90、12

5、0、150、180 min，經(jīng)心尖取血0.2 mL；通過HPLC與LC-MS方法檢測異煙肼血漿藥物濃度及210 min肝臟組織中異煙肼、乙酰異煙肼、異煙酸濃度。通過RT-PCR方法，檢測各組十二指腸與腎臟樣本中轉(zhuǎn)運體mRNA的表達，通過Western-blot方法，檢測各組肝臟樣本中異煙肼代謝相關(guān)蛋白的表達。
　　結(jié)果：1.建立了HPLC與LC-MC檢測方法，可以滿足檢測大鼠血漿和肝組織中異煙肼及其代謝產(chǎn)物乙酰異煙肼和異煙酸濃度變

6、化的要求。2.一次性給予橙汁，發(fā)現(xiàn)橙汁可影響異煙肼血漿藥物濃度：異煙肼血藥濃度顯著降低。3.長期給予橙汁（30天）發(fā)現(xiàn)飲用橙汁可以引起異煙肼血漿藥-時曲線發(fā)生變化：異煙肼血漿藥物濃度顯著增加，同時監(jiān)測到代謝產(chǎn)物異煙酸的血漿濃度增加。進一步分子生物學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，橙汁與異煙肼均可影響大鼠腸道外排轉(zhuǎn)運體與腎臟外排轉(zhuǎn)運體 mRNA的表達：橙汁抑制腸道腸道外排轉(zhuǎn)運體BCRP、ATP8B1與腎臟外排轉(zhuǎn)運體MATE2-K mRNA的表達；異煙肼抑制腸道

7、外排轉(zhuǎn)運體BCRP、ATP8B1 mRNA的表達，增加腎臟MRP4的表達。同時，橙汁可以使得肝臟中異煙肼代謝蛋白NAT2、FAAH1表達增加，異煙肼可引起異煙肼代謝蛋白FAAH1、CYP2E1、GST表達增加。4.進一步延長給藥（60天、180天）；分別檢測60天與180天異煙肼血漿藥物濃度，表明橙汁可引起異煙肼血藥濃度發(fā)生改變：橙汁可引起異煙肼血藥濃度明顯增加；同時檢測180天各組肝臟中乙酰異煙肼與異煙酸濃度，發(fā)現(xiàn)肝臟中乙酰異煙肼與異

8、煙酸濃度顯著增加。另外，分子生物學(xué)檢測發(fā)現(xiàn)：橙汁抑制腸道外排轉(zhuǎn)運體BCRP、ATP8B1與腎臟外排轉(zhuǎn)運體MRP4、MATE2-K mRNA表達水平，并引起肝臟中NAT2、FAAH1、GLS2蛋白表達增加；長期服用異煙肼可誘導(dǎo)腎臟外排轉(zhuǎn)運體MRP4，抑制腸道外排轉(zhuǎn)運體BCRP、腎臟外排轉(zhuǎn)運體MATE2-K，引起肝臟中FAAH1、GLS2、CYP2E1、GST蛋白增加。結(jié)論：1.柑橘類果汁中的橙汁可影響異煙肼在大鼠體內(nèi)的藥代動力學(xué)：無論飲用