獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷鎮(zhèn)痛作用及其機(jī)理的研究.pdf

1、目的:
　　 1、建立和比較實(shí)驗(yàn)性神經(jīng)病理性疼痛大鼠的造模方法。
　　 2、從獨(dú)一味藥材中富集提取總環(huán)烯醚萜苷，研究其對神經(jīng)病理性疼痛大鼠的鎮(zhèn)痛作用，初步探討其鎮(zhèn)痛作用機(jī)制，為指導(dǎo)獨(dú)一味的臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)。
　　 方法:
　　 1、采用大孔吸附樹脂結(jié)合聚酰胺柱色譜的方法，從獨(dú)一味藥材中富集分離總環(huán)烯醚萜苷，并運(yùn)用高效液相色譜法(HPLC)對其進(jìn)行含量測定。
　　 2、運(yùn)用坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷性(

2、SNI)模型建立的方法，建立大鼠神經(jīng)病理性疼痛模型。
　　 3、獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷通過灌胃方式給藥后，采用機(jī)械縮足反應(yīng)閾值的實(shí)驗(yàn)評價(jià)其體內(nèi)鎮(zhèn)痛作用。
　　 4、取大鼠腰椎膨大部位(L4～L6)，以NO、總NOS和細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10為檢測指標(biāo)，按照試劑盒的規(guī)定，運(yùn)用生化分析方法將純化得的有效部位進(jìn)行鎮(zhèn)痛作用的研究，并將取得的腰椎膨大部位以p-CREB為抗體采用免疫組織化學(xué)法進(jìn)行分析，為進(jìn)一步應(yīng)用和開

3、發(fā)獨(dú)一味功能性藥品、保健品提供理論依據(jù)。
　　 結(jié)果:
　　 1、獨(dú)一味總環(huán)烯醚萜苷的分析結(jié)果表明，獨(dú)一味經(jīng)過分離提取過程后的總環(huán)烯醚萜苷和8-(O)-乙酰山梔子苷甲酯具有相似的紫外吸收，8-(O)-乙酰山梔子苷甲酯的最大吸收波長為235nm，經(jīng)過HPLC含量測定，測得總環(huán)烯醚萜苷中環(huán)烯醚萜苷的含量約為70.4％。通過高效液相色譜分析顯示，獨(dú)一味中總環(huán)烯醚萜苷的主要成分為8-(O)-乙酰山梔子苷甲酯、山梔子苷甲酯等。

4、r>　　 2、大鼠實(shí)驗(yàn)證明，SNI模型建立的方法成功造模，形成慢性神經(jīng)性疼痛模型。并且由大鼠體內(nèi)試驗(yàn)結(jié)果顯示，獨(dú)一味能使神經(jīng)性疼痛大鼠精神好轉(zhuǎn)，活動(dòng)增多，機(jī)械痛閾值升高，改善腳爪外翻的癥狀。
　　 3、大鼠實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，獨(dú)一味高、中、低(250mg/kg，500mg/kg，1000mg/kg)三個(gè)劑量組均能顯著降低神經(jīng)性疼痛大鼠脊髓中的NO、總NOS值，以及降低細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β、IL-10的值。
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5、、以p-CREB為抗體的免疫組化，與正常組，假手術(shù)組相比，模型組、獨(dú)一味劑量組的陽性光密度值增高，模型組與獨(dú)一味高中低劑量組比較，陽性光密度值也有所增高，由此可證明獨(dú)一味可明顯降低p-CREB的陽性光密度值。
　　 結(jié)論:
　　 1、聚酰胺柱法結(jié)合大孔吸附樹脂可以更好地富集分離獨(dú)(一)味總環(huán)烯醚萜苷。
　　 2、在體內(nèi)試驗(yàn)中，獨(dú)(一)味總環(huán)烯醚萜苷可以表現(xiàn)出良好的對神經(jīng)性疼痛模型起到鎮(zhèn)痛作用。
　　 3、

6、獨(dú)(一)味能顯著降低NO和總NOS的表達(dá)，還能降低細(xì)胞因子TNF-α、IL-1β的表達(dá)，增加IL-10的表達(dá)，由此可得獨(dú)一味能顯著降低神經(jīng)性疼痛大鼠的星形膠質(zhì)細(xì)胞和脊髓小膠質(zhì)細(xì)胞量，減輕神經(jīng)損傷，防止神經(jīng)性疼痛的發(fā)生與發(fā)展，確定了，獨(dú)一味鎮(zhèn)痛活性的有效部位為總環(huán)烯醚萜苷，進(jìn)一步闡明了獨(dú)一味鎮(zhèn)痛活性部位與鎮(zhèn)痛活性之間的聯(lián)系，為在臨床上用中草藥防止神經(jīng)性疼痛開辟了一條新的思路，豐富了傳統(tǒng)的中醫(yī)理論依據(jù)，但其確切的有效成分及作用機(jī)制還需進(jìn)一步