5-羥色胺調控奶牛乳腺上皮細胞(MAC-T)增殖的機制研究.pdf

1、5-HT被認為是一種重要的泌乳穩(wěn)態(tài)和退化局部調控因子。本實驗室前期研究發(fā)現(xiàn)5-HT通過改變Bax/Bcl-2的值雙向調控奶牛乳腺上皮細胞（MAC-T）的命運，即短時間5-HT處理，促進MAC-T細胞的增殖，抑制凋亡；而長時間5-HT處理抑制MAC-T細胞的增殖，促進凋亡。但其影響MAC-T細胞增殖的機制尚需進一步明確和確證。5-HT作為乳腺內局部產生的活性物質，其作用與其轉運和代謝、受體以及與其他因子的互作有關。本論文在本實驗室前期研究

2、基礎上，從以上三個方面進一步探尋5-HT調控細胞增殖的機制。
　　為了驗證5-HT對細胞增殖的調控是否與轉運和代謝過程相關，本研究利用RT-PCR技術在奶牛乳腺組織中檢測到SERT和5-HT分解酶（Monoamine oxidase，MAO）的表達，但在MAC-T細胞中僅檢測到MAO的表達，未能檢測到SERT的表達。因此，5-HT對MAC-T細胞增殖的調控與其轉運過程無關。
　　本實驗室前期研究表明MAC-T細胞表達多種亞型

3、的5-HT受體（5-HTR1B，2A，2B，4和7等），并發(fā)現(xiàn)5-HT對MAC-T細胞增殖的促進作用是通過1B、4亞型受體來實現(xiàn)的。本論文對該結果進行了確證，并對信號通路進行了探索。結果顯示，單獨5-HT（20μM）處理MAC-T細胞24h，mTOR蛋白的相對表達量不受影響，但5-HT（20μM）與1B（SB224289）或4亞型（SB204070）受體拮抗劑同時處理MAC-T細胞24h，mTOR、eEF2和JAK2、STAT5蛋白表達

4、顯著下降，而4EBP1和S6K1蛋白表達變化不明顯。這提示5-HT對MAC-T增殖的誘導作用是通過1B、4亞型受體激活mTOR-eEF2和JAK2-STAT5信號通路來實現(xiàn)的。
　　5-HT在機體中不是單獨起作用，而是與其他因子共同作用。有研究證明催乳素（Prolactin，PRL）可以促進5-HT的分泌，并且研究過程中我們觀察到在正常培養(yǎng)基和在含催乳激素培養(yǎng)基中取得的結果有一定差異。我們推測，5-HT可能與PRL互作，共同調控乳

5、腺上皮細胞的功能。因此，本研究對此進行了初步探索，發(fā)現(xiàn)PRL與5-HT共同處理，細胞增殖速度和mTOR的表達水平均顯著高于5-HT或PRL單獨處理組。這表明5-HT與PRL互作，激活mTOR信號通路，促進MAC-T細胞增殖。
　　總之，上述結果提示,(1)5-HT與1B、4亞型受體結合，激活mTOR-eEF2和/或JAK2-STAT5信號通路，促進MAC-T細胞增殖。(2）5-HT與PRL互作，共同激活mTOR信號通路，促進MAC