具有雙靶點抑制活性的抗AD抑制劑的設計、合成及藥理活性初篩.pdf

1、阿爾茨海默病（AD）是一種神經(jīng)退行性疾病，其病理特征主要表現(xiàn)在淀粉樣蛋白斑和神經(jīng)纖維纏結。研究表明，導致阿爾茨海默病的病理機制是多方面的，因此通過單一的靶點來緩解或者治愈AD的可能性是很小的。針對AD復雜的病理機制，本文選擇乙酰膽堿酯酶（AchE）和β-分泌酶（BACE-1）作為雙靶點研究對象：其中乙酰膽堿酯酶能夠催化水解神經(jīng)遞質(zhì)乙酰膽堿，減少神經(jīng)遞質(zhì)的含量，在神經(jīng)傳導過程中起著關鍵性的作用；β-分泌酶，是Aβ形成過程的限速酶，具有神經(jīng)

2、毒性的Aβ在腦內(nèi)聚集形成老年斑，是導致神經(jīng)細胞凋亡的主要元兇。通過計算機輔助藥物設計軟件，設計、合成同時對AchE和BACE-1有抑制效果的小分子化合物，并對化合物進行藥理活性初篩，為新型的抗AD藥物的設計和結構優(yōu)化提供理論支持和實驗依據(jù)。
　　 本文研究的主要內(nèi)容如下：
　　 1．具有雙靶點抑制活性的抗AD小分子化合物的設計首先，利用課題組已設計得到的AchE抑制劑藥效團模型，以取代苯基哌嗪為基本結構設計出一系列具有較

3、好預測活性的化合物；其次，利用計算機輔助設計的Catalyst軟件構建出具有可靠預測能力的BACE-1抑制劑藥效團模型；最后，以設計出的取代苯基哌嗪類化合物為先導化合物，通過藥效團模型對比，結構優(yōu)化等方法，設計出六個具有雙靶點抑制活性的目標化合物。
　　 2．目標化合物的合成、結構鑒定以微波催化合成為主要方法合成得到了6個目標化合物，利用UV、1H-NMR、13C-NMR、HPLC等方法對目標化合物進行了結構和純度確證。

4、　　 3．藥理活性初篩AchE抑制活性：利用經(jīng)典的Ellman方法，檢測化合物對SD大鼠海馬回部位AchE的抑制作用。實驗結果顯示目標化合物1和4對AchE有一定的抑制活性。在濃度10μM條件下，化合物4的抑制活性達到50％，接近陽性對照Tacrine的抑制活性（53％）。
　　 SH-SY5Y細胞保護活性：分別利用H2O2和氯化鈷誘導SH-SY5Y細胞損傷，采用MTT法檢測細胞存活率，考察目標化合物對神經(jīng)細胞的保護作用。結果

5、顯示，只有化合物4對雙氧水損傷的SH-SY5Y細胞有一定的保護作用，在濃度為1μM時細胞存活率提高30％，其他化合物作用不明顯；而化合物對氯化鈷損傷的SH-SY5Y細胞均有一定的保護作用，其中化合物2在1μM時使細胞存活率提高27％。
　　 4．藥效團模型驗證通過藥理實驗結果與所構建的藥效團模型的活性預測值進行比較，發(fā)現(xiàn)藥效團模型具有一定的可靠性和預測能力，對抗AD的多靶點抑制劑的設計具有指導意義。
　　 5．討論

6、>　　 本文利用計算機輔助藥物設計軟件構建了AchE抑制劑和BACE-1抑制劑藥效團模型，并根據(jù)模型設計得到了以苯基哌嗪和氨基噻唑為基本結構的雙靶點抑制劑，并通過體外活性實驗，包括酶實驗和細胞實驗，對化合物的生物活性進行評價。
　　 本文創(chuàng)新之處在于：建立了具有很好活性預測能力的BACE-1藥效團模型，并且設計了具有雙靶點（AchE和BACE-1）抑制活性的小分子化合物；在細胞活性測試中，發(fā)現(xiàn)化合物對氯化鈷損傷的SH-SY5Y