艾塞那肽對間歇性高糖影響β細(xì)胞增殖周期的干預(yù)機(jī)制研究.pdf

1、背景:當(dāng)今,全球糖尿病正處于快速增長期,我國糖尿病患病率也逐年增高,現(xiàn)已成為僅次于印度的糖尿病第二大國。2型糖尿病發(fā)病隱匿,患者病程長,隨著病程的進(jìn)展,胰島β細(xì)胞功能漸進(jìn)衰竭。因此,探索糖尿病的發(fā)病機(jī)制一直是糖尿病領(lǐng)域研究的熱點(diǎn)及重點(diǎn)。糖尿病患者體內(nèi)的血糖穩(wěn)態(tài)遭到破壞,不僅存在血糖升高,且包含著另一個(gè)重要的方面即血糖波動(dòng)。正常人的血糖受到精密的調(diào)控,被限定在一個(gè)很小的范圍內(nèi),而糖尿病患者的血糖波動(dòng)明顯增加。波動(dòng)性高血糖對糖尿病并發(fā)癥的影

2、響已有較多的研究,業(yè)已證實(shí)其能增強(qiáng)蛋白激酶C(PKC)的活性,激活氧化應(yīng)激反應(yīng),同時(shí)還可以促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞的凋亡。但是關(guān)于波動(dòng)性高糖對胰島β細(xì)胞量及β細(xì)胞增殖的影響目前鮮見研究報(bào)道。
　　 隨著研究的深入,人們逐漸認(rèn)識(shí)到胰島β細(xì)胞“質(zhì)”和“量”的動(dòng)態(tài)變化對于血糖的調(diào)控以及糖尿病的臨床進(jìn)程都具有舉足輕重的影響。β細(xì)胞其數(shù)目的變化與其他細(xì)胞一樣,受到細(xì)胞周期進(jìn)程的調(diào)控。β細(xì)胞的細(xì)胞周期按照各時(shí)相(G1-S—G2-M)嚴(yán)格有序進(jìn)行。細(xì)胞周

3、期又受到細(xì)胞周期相關(guān)系列蛋白的嚴(yán)密調(diào)控,其中一些蛋白促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程,起到正性調(diào)控的作用,另一方面,一些蛋白阻滯細(xì)胞周期進(jìn)程,對細(xì)胞周期進(jìn)程進(jìn)行負(fù)性調(diào)控。很多因素可能通過影響某些細(xì)胞周期蛋白,進(jìn)而使細(xì)胞周期的調(diào)控障礙而影響細(xì)胞增殖,如:高糖、高脂等。細(xì)胞周期相關(guān)蛋白細(xì)胞周期素D1(cyclinD1)是一種促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程的蛋白,它在細(xì)胞周期進(jìn)程中與其相應(yīng)的細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶(cyclindependent kinase CDK)結(jié)合

4、在一起,驅(qū)動(dòng)細(xì)胞周期進(jìn)程,cyclinD1在β細(xì)胞中表達(dá),調(diào)節(jié)β細(xì)胞的增殖。p21與p27是兩個(gè)抑制細(xì)胞周期進(jìn)程的蛋白,他們均可與cyclin-CDKs結(jié)合,使該復(fù)合物的激酶活性喪失,阻滯細(xì)胞周期,對細(xì)胞周期起到負(fù)性調(diào)控的作用。S期激酶相關(guān)蛋白2(S-phase kinase associatedprotein-2 Skp2)可通過泛素化降解p27,從而促進(jìn)細(xì)胞周期進(jìn)程。這幾個(gè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白對細(xì)胞增殖的影響可能在整個(gè)細(xì)胞周期進(jìn)程中起到

5、重要的作用。
　　 近年來探尋促進(jìn)β細(xì)胞的增殖及減少凋亡的研究備受關(guān)注。胰高糖素樣肽-1是由小腸內(nèi)分泌L細(xì)胞分泌的腸道促胰島激素,可促進(jìn)胰島β細(xì)胞增殖,減少凋亡,增加胰島β細(xì)胞數(shù)量。這使得GLP-1越來越受到研究者們的重視,然而GLP-1是否可以通過改變某些細(xì)胞周期相關(guān)蛋白而影響β細(xì)胞的周期變化,進(jìn)而影響到細(xì)胞的增殖活性,目前仍不明了。
　　 因此,本課題以β細(xì)胞株INS-1細(xì)胞為研究對象,從以下幾個(gè)方面進(jìn)行相關(guān)研究:1

6、,觀察間歇性高糖對INS-1細(xì)胞凋亡的影響并探討其可能的作用機(jī)制。2,了解INS-1細(xì)胞增殖水平發(fā)生變化時(shí)的細(xì)胞周期分布的改變,通過檢測間歇性高糖對細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclinD1、p21、p27及Skp2蛋白表達(dá)水平的影響,探討間歇性高糖時(shí)INS-1細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期進(jìn)程與細(xì)胞周期相關(guān)蛋白變化的關(guān)系。3,觀察GLP-1受體激動(dòng)劑Exenatide對間歇性高糖影響INS-1細(xì)胞的作用,檢測應(yīng)用Exenatide后細(xì)胞增殖、凋亡水平、細(xì)胞

7、周期的分布,及細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclinD1、p21、p27及Skp2蛋白表達(dá)水平,探討Exenatide對間歇性高糖影響INS-1細(xì)胞是否具有保護(hù)作用。
　　 第一部分、間歇性高糖對INS-1細(xì)胞凋亡的影響及其機(jī)制探討
　　 目的:探討間歇性高糖對INS-1細(xì)胞凋亡的影響及可能的作用機(jī)制。
　　 方法:
　　 (1)INS—1細(xì)胞的培養(yǎng)及活性鑒定:以含10％胎牛血清的RPMI-1640完全培養(yǎng)基在37

8、℃,5％CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)細(xì)胞。0.4％臺(tái)盼藍(lán)染色檢測細(xì)胞活性。
　　 (2)間歇性高糖對INS-1細(xì)胞凋亡的影響:用6孔板鋪板細(xì)胞,用無酚紅、無血清RPMI-1640預(yù)處理,37℃、5％CO2中培養(yǎng)6h,使其處于同步化狀態(tài)。每24 h換液。實(shí)驗(yàn)分為3組:正常葡萄糖濃度組(簡稱正常糖組),即細(xì)胞培養(yǎng)于5.5mmol/L葡萄糖濃度的RPMI-1640完全培養(yǎng)基；恒定性高濃度葡萄糖組(簡稱恒定性高糖組),細(xì)胞培養(yǎng)于30 mmol/L

9、葡萄糖濃度的RPMI-1640完全培養(yǎng)基；間歇性高濃度葡萄糖組(簡稱間歇性高糖組),即每24 h輪換培養(yǎng)于5.5mmol/L或30mmol/L葡萄糖濃度的RPMI-1640完全培養(yǎng)基。各組細(xì)胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)7天,Annexin V-FITC/PI流式檢測細(xì)胞凋亡率。
　　 (3)間歇性高糖對INS-1細(xì)胞活性氧(ROS)水平及黃嘌呤氧化酶(XOD)水平的影響:分組及培養(yǎng)條件同上,熒光探針DCFH—DA法檢測細(xì)胞活

10、性氧(ROS)水平,酶標(biāo)分光光度法檢測細(xì)胞黃嘌呤氧化酶(XOD)含量。
　　 結(jié)果:
　　 (1)INS-1細(xì)胞形態(tài)觀察及活性測定:INS-1細(xì)胞多數(shù)為不規(guī)則但折光性強(qiáng),細(xì)胞有連接融合傾向,胞漿內(nèi)可見顆粒。臺(tái)盼藍(lán)染色細(xì)胞活性為(94.00±1.35)％。
　　 (2)間歇性高糖對INS-1細(xì)胞凋亡影響:在正常糖組,INS-1凋亡較少(8.91±2.92)％,恒定性高糖組INS-1凋亡率增加(20.92±3.88)

11、％,間歇性高糖組INS-1細(xì)胞凋亡增多更加明顯(30.67±4.48)％。三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=40.842,P=0.000),恒定性高糖組和間歇高糖組的凋亡率與正常糖組相比較都具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000,P=0.000)；間歇性高糖組的凋亡率高于恒定性高糖組(P=0.002)。
　　 (3)間歇性高糖對INS-1細(xì)胞活性氧(ROS)水平的影響:正常糖組的INS-1細(xì)胞內(nèi)ROS的含量處于較低水平(DCFH平均熒光強(qiáng)度為

12、:156.00±13.27,恒定性高糖組(311.00±22.77)和間歇性高糖組(409.60±12.44)INS-1細(xì)胞內(nèi)ROS的含量均增多,三組間ROS差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=288.649,P=0.000),恒定性高糖組和間歇性高糖組ROS水平均高于正常糖組(P=0.000。P=0.000),且恒定性高糖組與間歇性高糖組的ROS水平比較也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.000)。
　　 (4)間歇性高糖對INS-1細(xì)胞黃嘌呤氧化酶

13、(XOD)含量的影響:正常糖組INS—1細(xì)胞內(nèi)XOD的含量處于較低水平(XOD的OD值:0.23±0.03),恒定高糖組(0.58±0.03)和間歇性高糖組(0.79±0.03)INS-1細(xì)胞內(nèi)XOD的含量都明顯增多,三組間XOD差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=84.7.885,P=0.000),恒定性高糖組和間歇性高糖組與正常糖組之間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,P=0.000),且恒定性高糖組INS-1細(xì)胞XOD含量明顯低于間歇性高

14、糖組(P=0.000)。
　　 結(jié)論:正常糖組INS-1細(xì)胞的凋亡率明顯低于恒定性高糖組及間歇性高糖組,其中間歇性高糖組的凋亡率最高。其相應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)ROS及XOD含量為:正常糖組<恒定性高糖組<間歇性高糖組,提示氧化應(yīng)激可能與INS-1細(xì)胞凋亡率增高有關(guān)。
　　 第二部分、間歇性高糖對INS-1細(xì)胞增殖和細(xì)胞周期進(jìn)程的影響及其分子機(jī)制探討
　　 目的:探討間歇性高糖對INS-1細(xì)胞周期調(diào)控蛋白水平的影響,進(jìn)而了解

15、影響INS-1細(xì)胞增殖的細(xì)胞周期進(jìn)程的可能分子機(jī)制。
　　 方法:
　　 (1)間歇性高糖對INS-1細(xì)胞周期進(jìn)程的影響:用6孔板鋪板細(xì)胞,用無酚紅、無血清RPMI-1640預(yù)處理,即37℃、5％CO2中培養(yǎng)6h,使其處于同步化狀態(tài)。每24 h換液。實(shí)驗(yàn)分為3組:正常糖組,即培養(yǎng)于5.5mmol/L葡萄糖濃度的RPMI-1640完全培養(yǎng)基；恒定性高糖組,培養(yǎng)于30mmol/L葡萄糖濃度的RPMI-1640完全培養(yǎng)基；間歇

16、性高糖組,即每24 h輪換培養(yǎng)于5.5mmol/L或30mmol/L葡萄糖濃度的RPMI-1640完全培養(yǎng)基。各組細(xì)胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)7天,碘化丙啶染色及流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。
　　 (2)間歇性高糖對INS-1細(xì)胞cyclinD1、p21、p27、Skp2蛋白表達(dá)的影響:分組及培養(yǎng)條件同上,用免疫熒光細(xì)胞染色各組INS-1細(xì)胞,倒置熒光顯微鏡下觀察INS—1細(xì)胞中cyclinD1、p21、p27、Skp2蛋白的

17、表達(dá),用Western-blot檢測cyclinD1、p21、p27、Skp2蛋白表達(dá)水平,計(jì)算蛋白相對灰度值。
　　 (3)間歇性高糖對INS-1細(xì)胞增殖活性的影響:分組及培養(yǎng)條件同上,CellCounting Kit-8試劑盒檢測細(xì)胞增殖活性。
　　 結(jié)果:
　　 (1)間歇性高糖對INS-1細(xì)胞周期進(jìn)程的影響:與正常糖組G0/G1期細(xì)胞比值(48.75±3.11)％相比較,恒定性高糖組(56.54±3.50

18、)％及間歇性高糖組(65.53±3.63)％的比值明顯增高,三組間G0/G1期細(xì)胞比值差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=30.214,P=0.000)。恒定性高糖組和間歇性高糖組G0/G1期細(xì)胞比值均高于正常糖組(P=0.004。P=0.000),間歇性高糖組也高于恒定性高糖組(P=0.001)。
　　 (2)間歇性高糖對INS-1細(xì)胞cyclinD1、p21、p27、Skp2蛋白表達(dá)的影響:
　　 Western blot方法檢測

19、的三組間cyclinD1蛋白表達(dá)水平有顯著差異(F值=97.125,P=0.000)。恒定性高糖組(0.31±0.02)及間歇性高糖組cyclinD1表達(dá)水平(0.18±0.03)明顯低于正常糖組(0.46±0.03),P均=0.000,且間歇性高糖組cyclinD1蛋白表達(dá)也低于恒定性高糖組(P=0.001)。
　　 Western blot方法檢測三組間Skp2蛋白表達(dá)水平有顯著差異(F=45.972,P=0.000)。恒定

20、性高糖組(0.31±0.03)及間歇性高糖組Skp2表達(dá)水平(0.21±0.03)明顯低于正常糖組(0.48±0.05),P均=0.000,且間歇性高糖組Skp2蛋白表達(dá)也低于恒定性高糖組(P=0.011)。
　　 Western blot方法檢測三組問p27蛋白表達(dá)水平有顯著差異(F=79.360,P=0.000)。恒定性高糖組p27表達(dá)水平(0.38±0.04)及間歇性高糖組(0.51±0.03)明顯高于正常糖組(0.20±

21、0.03),P均=0.000,且間歇性高糖組p27蛋白表達(dá)水平也高于恒定性高糖組(P=0.002)。
　　 Western blot方法檢測三組間p21蛋白表達(dá)水平有顯著差異(F=50.220,P=0.000)。恒定性高糖組p21表達(dá)水平(0.40±0.03)及間歇性高糖組(0.51+0.04)高于正常糖組(0.19±0.05),與正常糖組比較,恒定性高糖組P=0.001,間歇性高糖組P=0.000,且間歇性高糖組p21蛋白表達(dá)

22、水平也高于恒定性高糖組(P=0.011)。
　　 (3)間歇性高糖對INS-1細(xì)胞增殖活性的影響:正常糖組細(xì)胞增殖活性較高(OD值:1.51±0.14)。恒定性高糖組(0.67±0.04)與間歇性高糖組(0.45±0.02)的增殖活性都較正常糖組明顯降低,三組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=2778,P=0.000),恒定性高糖組和間歇性高糖組與正常糖組之間的差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,P=0.000),且間歇性高糖組明顯低于

23、恒定性高糖組(P=0.000)。
　　 結(jié)論:本部分研究結(jié)果顯示:體外不同血糖濃度變化影響INS-1細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制蛋白p21,p27,其表達(dá)水平為正常糖組<恒定性高糖組<間歇性高糖組；而細(xì)胞周期正性調(diào)控蛋白cyclinD1,Skp2蛋白的表達(dá)水平則是正常糖組>恒定性高糖組>間歇性高糖組,與此相應(yīng)的是細(xì)胞周期進(jìn)程中G0/G1期細(xì)胞比值依次增高,細(xì)胞的增殖活性依次減低。這些結(jié)果表明:間歇性高糖可通過改變INS-1細(xì)胞周期

24、調(diào)控蛋白水平,進(jìn)一步阻滯INS-1細(xì)胞周期進(jìn)程,從而減弱細(xì)胞的增殖活性。
　　 第三部分、艾塞那肽對間歇性高糖影響INS-1細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期進(jìn)程干預(yù)的分子機(jī)制
　　 目的:通過探討艾塞那肽對間歇性高糖影響INS—1細(xì)胞增殖及細(xì)胞周期進(jìn)程的相關(guān)蛋白的作用,了解其干預(yù)細(xì)胞增殖變化的有關(guān)分子機(jī)制。
　　 方法:
　　 (1)艾塞那肽對間歇性高糖作用下INS-1細(xì)胞凋亡的影響:實(shí)驗(yàn)分為5組:1,正常糖組,即培養(yǎng)

25、于5.5mmol/L葡萄糖濃度的RPMI-1640完全培養(yǎng)基；2,恒定性高糖組,培養(yǎng)于30 mmol/L葡萄糖濃度的RPMI-1640完全培養(yǎng)基；3,間歇性高糖組,即每24 h輪換培養(yǎng)于5.5mmol/L或30mmol/L葡萄糖濃度的RPMI-1640完全培養(yǎng)基；4,恒定性高糖+Exenatide組,培養(yǎng)基含30mmol/L葡糖糖并加入終濃度為100 nmol/L Exenatide；5,間歇性高糖+Exenatide組,間歇性高糖的基

26、礎(chǔ)上加入終濃度為100nmol/L Exenatide。各組細(xì)胞在37℃、5％CO2條件下培養(yǎng)7天,Annexin V-FITC/PI流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡率。
　　 (2)艾塞那肽對間歇性高糖作用下INS-1細(xì)胞活性氧(ROS)水平的影響:分組及培養(yǎng)條件同上,熒光探針DCFH-DA法檢測細(xì)胞活性氧(ROS)水平。
　　 (3)艾塞那肽對間歇性高糖作用下INS-1細(xì)胞黃嘌呤氧化酶(XOD)含量的影響:分組及培養(yǎng)條件同上,

27、酶標(biāo)分光光度法檢測細(xì)胞黃嘌呤氧化酶(XOD)含量。
　　 (4)艾塞那肽對間歇性高糖作用下INS-1細(xì)胞增殖活性的影響:分組及培養(yǎng)條件同上,Cell Counting Kit-8試劑盒檢測細(xì)胞增殖活性。
　　 (5)艾塞那肽對間歇性高糖作用下INS-1細(xì)胞周期進(jìn)程的影響:分組及培養(yǎng)條件同上,碘化丙啶染色及流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期。
　　 (6)艾塞那肽對間歇性高糖作用下INS—1細(xì)胞cyclinD1、p21、p27

28、、Skp2蛋白表達(dá)的影響:分組及培養(yǎng)條件同上,Western—blot檢測cyclinD1、p21、p27、Skp2蛋白的表達(dá),并用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)方法染色各組細(xì)胞,觀察蛋白表達(dá)情況。
　　 結(jié)果:
　　 (1)艾塞那肽對間歇性高糖作用下INS-1細(xì)胞凋亡的影響:
　　 各組細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示,五組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=44.996,P=0.000)。恒定性高糖+Exenatide組的凋亡率(8.81±1.96

29、)％明顯低于恒定性高糖組(20.92±3.88)％,P=0.000,而與正常糖組(8.91±2.92)％比較,差異則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.962)。間歇性高糖+Exenatide組的凋亡率為(9.18±2.52)％,明顯低于間歇性高糖組(30.67±4.48)％,(P=0.000),與正常糖組(8.91±2.92)％比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.889)。
　　 (2)艾塞那肽對間歇性高糖作用下INS-1細(xì)胞活性氧(ROS)水

30、平的影響:
　　 各組細(xì)胞內(nèi)ROS含量:五組間INS-1細(xì)胞ROS水平有顯著性差異(F=182.781,P=0.000)。恒定性高糖+Exenatide組ROS水平(平均熒光強(qiáng)度為:202.20±14.55)明顯低于恒定性高糖組(311.00±22.77),P=0.000,但仍然高于正常糖組(156.00±13.27,P=0.000)。間歇性高糖+Exenatide組ROS水平(196.00±20.32)明顯低于間歇性高糖組(4

31、09.60±12.44),P=0.000,但仍然高于正常糖組(P=0.001)。
　　 (3)艾塞那肽對間歇性高糖作用下INS-1細(xì)胞黃嘌呤氧化酶(XOO)含量的影響:
　　 五組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=115.038,P,0.000),恒定性高糖+Exenatide組XOD含量(0.26±0.16)明顯低于恒定性高糖組(0.58±0.03),P=0.000。但與正常糖組(0.23±0.03)比較差異則無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P

32、=0.314)。間歇性高糖+Exenatide組XOD含量(0.23±0.02)明顯低于間歇性高糖組(0.79±0.33),P=0.000,而與正常糖組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.858)。
　　 (4)艾塞那肽對間歇性高糖作用下INS—1細(xì)胞增殖活性的影響:
　　 玉組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=3026,P=0.000),恒定性高糖+Exenatide組細(xì)胞增殖活性(1.54±0.13)明顯高于恒定性高糖組(0.67

33、±0.04),P=0.000,且高于正常糖組(1.51±0.14,P=0.018)。間歇性高糖+Exenatide組細(xì)胞增殖活性(1.45±0.12)明顯高于間歇性高糖組(0.45±0.02),P=0.000,但低于正常糖組(P=0.000)。
　　 (5)艾塞那肽對間歇性高糖作用下INS-1細(xì)胞周期進(jìn)程的影響:
　　 研究結(jié)果顯示:G0/G1期細(xì)胞比值五組間差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,(F=20.054,P=0.000)。恒定

34、性高糖+Exenatide組G0/G1期細(xì)胞比值(49.12±3.72)％明顯低于恒定性高糖組(56.54±3.50)％,P=0.004,但與正常糖組(48.75±3.11)％比較,沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.872)。間歇性高糖+Exenatide組G0/G1期細(xì)胞比值(49.73±4.04)％明顯低于間歇性高糖組(65.54±3.63)％,P=0.000,但與正常糖組比較,沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P=0.672)。
　　 (6)艾塞那肽

35、對間歇性高糖作用下INS-1細(xì)胞cyclinD1、p21、p27、Skp2蛋白表達(dá)的影響:
　　 五組INS-1細(xì)胞cyclinD1蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=29.284,P=0.000)。恒定性高糖+Exenatide組cyclinD1表達(dá)水平(0.41±0.02)明顯高于恒定性高糖組(0.31±0.02),P=0.006。但與正常糖組(0.46±0.03)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.131)。間歇性高糖+Exenat

36、ide組cyclinD1表達(dá)水平(0.43±0.07)明顯高于間歇性高糖組(0.18±0.03),P=0.000,但與正常糖組比較,則差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.347)。
　　 五組INS—1細(xì)胞Skp2蛋白表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(F=65.300,P=0.000),恒定性高糖+Exenatide組Skp2表達(dá)水平(0.65±0.05)明顯高于恒定性高糖組(0.31±0.03,P=0.000),且高于正常糖組(0.48±0.05,

37、P=0.001)。間歇性高糖+Exenatide組Skp2表達(dá)水平(0.66±0.05)明顯高于間歇性高糖組(0.21±0.03,P=0.000),且高于正常糖組(0.48±0.05,P=0.001)。
　　 五組間p27蛋白表達(dá)水平有顯著差異(F=54.514,P=0.000)。恒定性高糖+Exenatide組p27表達(dá)水平(0.24±0.03)明顯低于恒定性高糖組(0.38±0.04),P=0.000。但與正常糖組(0.20

38、±0.03)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.114)。間歇性高糖+Exenatide組p27表達(dá)水平(0.23±0.02)明顯低于間歇性高糖組(0.51±0.03),P=0.000,但與正常糖組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.092)。
　　 五組間p21蛋白表達(dá)水平有顯著差異(F=40.296,P=0.000)。恒定性高糖+Exenatide組p21表達(dá)水平(0.21±0.05)明顯低于恒定性高糖組(0.40±0.03),P=0

39、.000。但與正常糖組(0.19±0.05)比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.540)。間歇性高糖+Exenatide組p21表達(dá)水平(0.22±0.03)明顯低于間歇性高糖組(0.51±0.04),P=0.000,但與正常糖組比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.417)。
　　 結(jié)論:艾塞那肽的干預(yù)可減少間歇性及恒定性高糖下INS—1細(xì)胞內(nèi)ROS及XOD水平,進(jìn)而減少INS-1細(xì)胞的凋亡,同時(shí)在間歇性或恒定性高糖條件下,艾塞那肽使I