西南地區(qū)西瓜蔓枯病菌對啶酰菌胺的抗性監(jiān)測及抗性機(jī)理.pdf

1、西瓜作為重要的經(jīng)濟(jì)作物，在全國有著非常大的栽培面積。西瓜蔓枯病是發(fā)生十分嚴(yán)重、對西瓜產(chǎn)量和品質(zhì)有著極大影響的西瓜病害之一。我國對于西瓜蔓枯病的防治現(xiàn)階段以化學(xué)防治為主，常用藥劑有多菌靈、苯醚甲環(huán)唑等，化學(xué)藥劑的長期使用不可避免地使得病原菌抗藥性的發(fā)生，降低藥劑防治效果的同時(shí)增大了防治成本。啶酰菌胺作為一種較新的SDHIs類殺菌劑，已用于包括西瓜在內(nèi)的多種作物上多種病害的防治，是目前用量最大、使用范圍最廣的SDHIs類殺菌劑。但啶酰菌胺在

2、我國用于西瓜蔓枯病防治方面的研究報(bào)道較少，因此本研究擬通過對西南地區(qū)西瓜蔓枯病菌對啶酰菌胺的敏感性基線的建立、田間抗性的監(jiān)測、抗性菌株的生物學(xué)特性、抗性分子機(jī)理以及交互抗性等方面的研究，為啶酰菌胺在西瓜蔓枯病的防治提供用藥策略、抗性風(fēng)險(xiǎn)等的理論依據(jù)。
　　1.西瓜蔓枯病菌對啶酰菌胺的敏感性基線及抗性監(jiān)測
　　隨機(jī)選取分離自重慶、貴州、四川三個(gè)省市的100株西瓜蔓枯病菌野生菌株，采用菌絲生長速率法測定它們對啶酰菌胺的敏感性。結(jié)

3、果表明100株敏感菌株的EC50值在0.033μg/mL～0.180μg/mL之間，平均EC50值為0.085±0.037μg/mL。EC50的最大最小值相差5.4倍，均來自重慶合川所采集的菌株。且100株西瓜蔓枯病菌對啶酰菌胺的敏感性頻率呈連續(xù)分布，其頻率分布為近似正態(tài)的單峰曲線，因此可以采用這100個(gè)菌株的平均EC50值作為西瓜蔓枯病菌對啶酰菌胺的敏感性基線。測定得供試100株敏感菌株的MIC值得到其范圍在4～10μg/mL之間。結(jié)

4、合其敏感基線及測得的MIC值，將10μg/mL作為鑒別區(qū)分西瓜蔓枯病菌對啶酰菌胺抗性監(jiān)測的區(qū)分濃度。以10μg/mL為標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)測2014-2016年分離自川渝黔3地的共615株西瓜蔓枯病菌啶酰菌胺田間抗性發(fā)生與分布，結(jié)果表明田間暫無啶酰菌胺抗性菌株，抗性頻率為0，說明該地區(qū)西瓜蔓枯病菌未對啶酰菌胺產(chǎn)生抗性，因此啶酰菌胺可以作為多菌靈的替代藥劑用于該地區(qū)西瓜蔓枯病的防治。
　　2.西瓜蔓枯病菌啶酰菌胺抗性突變體的獲得及其遺傳穩(wěn)定性

5、r>　　通過紫外誘導(dǎo)和藥劑馴化共獲得4株疑似抗性突變體，測定其抗性倍數(shù)發(fā)現(xiàn)其中2株為中抗突變體、2株為高抗突變體。中抗突變體XF98-1和XF21-1的EC50值分別為1.489μg/mL、1.182μg/mL，抗性倍數(shù)分別為15、11；高抗突變體XF21-3和YC60-1的EC50值分別為108.037μg/mL和124.650μg/mL，抗性倍數(shù)為1010和1340。將獲得的抗性突變體在無藥的平板上連續(xù)培養(yǎng)8代后測定這些突變體的藥劑

6、敏感性，結(jié)果表明，2株中抗突變體XF98-1和XF21-1連續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)8代后對啶酰菌胺表現(xiàn)為敏感，說明其抗性不能穩(wěn)定遺傳；2株高抗突變體XF21-3和YC60-1連續(xù)轉(zhuǎn)接培養(yǎng)8代后其EC50值分別為73.046μg/mL和91.971μg/mL，抗性倍數(shù)為683和989，依然保持高抗水平，說明其抗性可穩(wěn)定遺傳。說明其抗性可穩(wěn)定遺傳。因此這2株高抗突變體用于以下的抗性菌株生物學(xué)特性和抗性機(jī)理研究。
　　3.西瓜蔓枯病菌啶酰菌胺抗性突

7、變體的生物學(xué)特性
　　室內(nèi)測定2株抗性突變體的生長、繁殖、致病等方面的生物學(xué)特性，結(jié)果表明：1株抗性突變體的菌落生長速率大于其出發(fā)菌株，但另1株與出發(fā)菌株無顯著差異；抗性突變體對溫度的適應(yīng)性與出發(fā)菌株無顯著差異，最適溫度都在20℃～30℃；1株抗性突變體的產(chǎn)生分生孢子的能力顯著高于出發(fā)菌株，但另1株與出發(fā)菌株無顯著差異；滲透壓敏感性測定表明抗性突變體對外界環(huán)境的滲透壓與親本菌株相比更為不敏感；室內(nèi)離體葉片測定抗性突變體的致病性，結(jié)

8、果表明其與野生菌株無顯著性差異。以上結(jié)果表明西瓜蔓枯病菌啶酰菌胺室內(nèi)抗性突變的綜合適合度與野生菌株無顯著差異。
　　室內(nèi)平板測定西瓜蔓枯病菌啶酰菌胺抗性突變體對萎銹靈、噻呋酰胺、乙霉威、戊唑醇、醚菌酯等5種殺菌劑的敏感性，結(jié)果表明：抗性突變體和出發(fā)菌株對SDHI類的萎銹靈、Carbamates類的乙霉威、DMI類的戊唑醇、QoI類的醚菌酯都表現(xiàn)為敏感，說明啶酰菌胺與這4種藥劑之間不存在交互抗性。但西瓜蔓枯病菌啶酰菌胺抗性突變體對同

9、屬SDHI類的噻呋酰胺表現(xiàn)為抗性，說明啶酰菌胺與噻呋酰胺之間存在正交互抗性。因此在田間使用啶酰菌胺防治西瓜蔓枯病時(shí)應(yīng)注意避免與噻呋酰胺交替使用，可以選擇戊唑醇等非同類型的殺菌劑使用。
　　4.西瓜蔓枯病菌對啶酰菌胺的抗性分子機(jī)理
　　用特異性引物WSQ1/WSQ2（5’-CTTGTCCCTGACATGACACTT-3’/5’-TCCTTGAGCAGTTGAGAATGG-3’）PCR擴(kuò)增西瓜蔓枯病菌啶酰菌胺抗性突變體及其出發(fā)菌