通心絡(luò)對(duì)糖尿病動(dòng)脈粥樣硬化大鼠Rho-Rho kinase信號(hào)通路影響的研究.pdf

1、目的：
　　 通過建立糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化大鼠的模型，研究此模型鼠Rho/Rho kinase表達(dá)與內(nèi)皮功能的關(guān)系，并觀察通心絡(luò)對(duì)模型鼠Rho/Rho kinase和血管內(nèi)皮功能的影響，以及二者之間的關(guān)系。
　　 方法：
　　 1、分組及藥物干預(yù):
　　 健康雄性Wistar大鼠20只，200-220g，6-8周齡。采用尾靜脈注射鏈脲佐菌素(STZ)制備糖尿病大鼠，3天后測(cè)空腹血糖大于16.5mmol/

2、fL，并出現(xiàn)多飲、多尿、多食癥狀，證實(shí)糖尿病造模成功。再給予高脂飼料喂養(yǎng)，5周后，超聲檢查提示動(dòng)脈粥樣斑塊形成，篩選出成功的糖尿病合并動(dòng)脈粥樣硬化模型。將造模成功的大鼠隨機(jī)分成模型組和通心絡(luò)治療組，同時(shí)設(shè)正常大鼠對(duì)照組5只（與模型組同時(shí)購(gòu)入）。正常對(duì)照組:用普通飼料喂養(yǎng)，用與藥劑等體積的生理鹽水灌胃;模型組:給予高脂飼料喂養(yǎng)，用與藥劑等體積的生理鹽水灌胃;通心絡(luò)組:給予高脂飼料喂養(yǎng)，再按1g/(kg*d)的劑量給予通心絡(luò)超微粉水溶液灌胃

3、。藥物干預(yù)6周。
　　 2、標(biāo)本留取
　　 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，10％水合氯醛0.3ml/kg于腹腔注射麻醉大鼠，麻醉之后斷尾取血1滴，應(yīng)用血糖儀測(cè)血糖;之后剪開腹腔，腹主動(dòng)脈取血5ml，靜置1小時(shí)，2500bp離心10min，取上清液分裝4管，每管50-70ul，-80℃冷柜保存;剪開胸腔，剪破心包，取主動(dòng)脈組織約100mg兩塊，洗凈血液，分裝兩管，于-80℃冷柜保存;另取主動(dòng)脈組織2.0(x)2.0(x)0.3cm大小，洗凈

4、血液，于甲醛中固定。
　　 3、指標(biāo)檢測(cè)
　　 1)取動(dòng)脈血，采用生化分析儀對(duì)不同組別大鼠血中低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)的水平。
　　 2)取動(dòng)脈血，采用Elisa方法測(cè)定eNOS、vWF、ET-1的水平。
　　 3)取主動(dòng)脈組織進(jìn)行HE染色:并觀察不同組別大鼠主動(dòng)脈組織的病理改變。
　　 4)取主動(dòng)脈組織，用Western blot的方法測(cè)

5、定不同組別大鼠Rho/Rho Kinase下游效應(yīng)物血管組織磷酸化蛋白(MYPT)的表達(dá)。
　　 4、數(shù)據(jù)處理和統(tǒng)計(jì)分析
　　 所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均采用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。所有統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)用SPSS13.0軟件包分析，P＜0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 1、血脂的檢測(cè)結(jié)果
　　 模型組與對(duì)照組比較，HDL-C明顯降低(p＜0.05)，TG、TC、LDL-C均明顯升高(p＜0.05);而經(jīng)通心絡(luò)治

6、療后，TG較模型組降低(p＜0.05)，而TC、LDL-C均較模型組僅有降低趨勢(shì)(p＞0.05)，HDL-C較模型組亦僅有升高趨勢(shì)(p＞0.05)。
　　 2、eNOS、vWF、ET-1的水平
　　 模型組eNOS較正常組降低(p＜0.05)，而通心絡(luò)組較模型組升高(p＜0.05);模型組vWF和ET-1均呈高表達(dá)(p＜0.05)，而通心絡(luò)組vWF和ET-1表達(dá)均下降(p＜0.05)。
　　 3、主動(dòng)脈HE染色觀

7、察結(jié)果
　　 對(duì)照組內(nèi)皮細(xì)胞完整，中膜平滑肌細(xì)胞排列整齊，未見泡沫細(xì)胞和脂質(zhì)沉積;模型組內(nèi)膜向內(nèi)突出，內(nèi)膜下可見空泡，內(nèi)膜下發(fā)生廣泛粥糜樣改變，外膜下炎性細(xì)胞浸潤(rùn);通心絡(luò)組:內(nèi)膜增厚減輕，泡沫細(xì)胞減少，平滑肌細(xì)胞排列紊亂明顯改善。
　　 4、主動(dòng)脈MYPT的表達(dá)
　　 模型組主動(dòng)脈內(nèi)MYPT的表達(dá)顯著高于正常對(duì)照組(p＜0.05)，通心絡(luò)組MYPT的表達(dá)較模型組顯著下降(p＜0.05)。
　　 結(jié)論：