MiR155在心臟移植物排斥反應(yīng)的作用及機(jī)制研究.pdf

1、第一部分心臟移植模型的建立和移植物局部淋巴細(xì)胞miR-155表達(dá)分析
　　目的：建立穩(wěn)定有效的小鼠腹部心臟移植模型。明確miR-155在移植物局部淋巴細(xì)胞的表達(dá)變化。
　　方法：1：以 C57BL/6小鼠為受體，Balb/c小鼠心臟作為供體，建立小鼠心臟移植急性反應(yīng)模型；以C57BL/6小鼠為受體，Bm12小鼠心臟作為供體，建立小鼠心臟移植慢性排斥反應(yīng)模型；觀察兩組移植物心臟的生存時(shí)間。2：在心臟急性排斥反應(yīng)移植后7天/慢性

2、排斥反應(yīng)后60天，觀察移植物心臟排斥反應(yīng)病理變化。3：分離移植物心臟局部淋巴細(xì)胞，qPCR檢測(cè)miR-155表達(dá)水平。
　　結(jié)果：1：在心臟移植急性/慢性排斥反應(yīng)模型中，同種異型移植組供心平均存活時(shí)間為（7.5±0.37）/（63.4±4.37）天;2：與同系移植組相比，兩種同種異型移植組移植物心肌組織內(nèi)均有不同程度炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)，伴明顯心肌細(xì)胞變性壞死，心肌間質(zhì)纖維化。3：移植物中局部淋巴細(xì)胞的miR155明顯升高。
　　結(jié)

3、論：本實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ湍茌^好的反應(yīng)急性/慢性排斥反應(yīng)的病理變化，達(dá)到模型建立標(biāo)準(zhǔn)，可以用于本課題移植免疫的研究。移植物局部淋巴細(xì)胞的miR-155表達(dá)明顯升高，可能對(duì)移植物排斥反應(yīng)有調(diào)節(jié)作用。
　　第二部分 miR-155在心臟急性排斥反應(yīng)中的作用及機(jī)制研究
　　目的：探討miR-155在心臟移植急性排斥反應(yīng)中的作用和機(jī)制。
　　方法:1：建立心臟移植急性排斥反應(yīng)模型，測(cè)定心臟移植物存活時(shí)間和組織局部的細(xì)胞因子表達(dá)變化，并對(duì)移

4、植物局部組織進(jìn)行病理染色。流式分析脾臟細(xì)胞的T細(xì)胞亞群變化。2：對(duì)建模成功的miR-155-/-小鼠進(jìn)行rIL-17A干預(yù)，并進(jìn)行病理分析及局部細(xì)胞因子分析。3：分離miR155-/-和/或 miR155+/+CD4+脾細(xì)胞，過(guò)繼輸入 Rag1-/-小鼠體內(nèi)，然后行心臟移植手術(shù)，觀察不同小組移植物排斥反應(yīng)程度，以及Th17比例變化。
　　結(jié)果:miR-155-/-組移植物存活時(shí)間延長(zhǎng)，心肌細(xì)胞炎癥細(xì)胞細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕，伴隨著細(xì)胞因

5、子IL-17A明顯減少。重組細(xì)胞因子IL-17A能夠逆轉(zhuǎn)這種保護(hù)作用。細(xì)胞過(guò)繼進(jìn)一步證實(shí)miR155-/-小鼠的保護(hù)作用是通過(guò)Th17細(xì)胞免疫反應(yīng)來(lái)實(shí)現(xiàn)的，并證實(shí)miR155敲除后的Th17細(xì)胞表型穩(wěn)定性明顯減弱。
　　結(jié)論：敲除miR155可能通過(guò)減弱Th17免疫效應(yīng)來(lái)緩解心臟移植物急性排斥反應(yīng)
　　第三部分 miR-155在心臟慢性排斥反應(yīng)中的作用及機(jī)制研究
　　目的：探討miR-155在心臟移植急性排斥反應(yīng)中的作

6、用和機(jī)制。
　　方法:1：建立心臟移植急性排斥反應(yīng)模型，測(cè)定心臟移植物存活時(shí)間和組織局部的細(xì)胞因子表達(dá)變化，并對(duì)移植物局部組織進(jìn)行病理染色。流式分析脾臟細(xì)胞的T細(xì)胞亞群變化。2：對(duì)建模成功的miR-155-/-小鼠進(jìn)行rIL-17A干預(yù)，并進(jìn)行病理分析及局部細(xì)胞因子分析。3：體外應(yīng)用miR-155+/+或者 miR-155-/-CD4+T細(xì)胞，進(jìn)行Th1/Th17/Treg誘導(dǎo)，流式檢測(cè)IFN-γ、IL-17A和Foxp3表達(dá)。并

7、對(duì)miR-155相關(guān)靶基因進(jìn)行檢測(cè)。
　　結(jié)果:miR-155-/-組移植物存活時(shí)間延長(zhǎng)，移植物血管病變及炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)明顯減輕，伴隨著細(xì)胞因子IFN-γ/IL-17A明顯減少。重組細(xì)胞因子IL-17A能夠逆轉(zhuǎn)這種保護(hù)作用。體外Th17細(xì)胞誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，miR-155缺失可以明顯減弱IL-17A表達(dá)。這種作用可能通過(guò)c-Maf或SOCS1來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
　　結(jié)論：敲除miR155也可以通過(guò)調(diào)節(jié)Th1/Th17免疫反應(yīng)來(lái)緩解慢性移植