慢性胰腺炎大鼠Fractalkine-CX3CR1的表達及α-生育酚和TRF干預(yù)作用機制研究.pdf

1、慢性胰腺炎(chronic pancreatitis, CP)是由多種因素造成的胰腺組織進行性的慢性炎癥性疾病，最終導(dǎo)致胰腺內(nèi)、外分泌功能不全。CP患者臨床表現(xiàn)為腹痛、脂肪瀉、糖尿病胰腺鈣化及胰腺假性囊腫等。CP在病理學(xué)上主要表現(xiàn)為大量的炎細胞浸潤，胰腺組織廣泛的纖維化，腺泡萎縮，胰管變形，其中纖維化的形成和大量細胞外基質(zhì)(extracelluar matrix, ECM)的沉積為主要病理學(xué)特征。由于其病因復(fù)雜，發(fā)病機制不明確，目前尚無

2、針對纖維化有效的治療方法。
　　 第一部分 DBTC尾靜脈注射CP大鼠模型的構(gòu)建
　　 目的：采用二丁基二氯化錫 (dibutyltin dichloride, DBTC)尾靜脈單次注射的方法，構(gòu)建CP大鼠模型，觀察CP大鼠病理學(xué)改變、胰腺纖維化程度及體內(nèi)氧化應(yīng)激水平，為后續(xù)開展CP相關(guān)機制研究奠定基礎(chǔ)。
　　 方法：20只雄性Wistar大鼠，體重180-200g，隨機分成慢性胰腺炎組(CP組)和對照組(Veh

3、icle control, VC組)。DBTC(8mg/kg)尾靜脈單次注射建立CP大鼠模型，對照組尾靜脈注射相同體積的溶劑。造模后每隔一周相同時間點監(jiān)測大鼠體重。4周后，腹腔注射戊巴比妥(50mg/kg)，心臟放血處死大鼠。蘇木素-伊紅(hematoxylin and eosin, HE)染色后行組織病理學(xué)評分來判斷胰腺組織損傷程度；以Sirius-Red染色和胰腺組織勻漿羥脯氨酸水平來評估胰腺組織纖維化程度；檢測胰腺組織羥脯氨酸評估

4、大鼠胰腺氧化應(yīng)激水平。
　　 結(jié)果：造模4周后， CP組大鼠存活率為80％，VC組大鼠存活率為100％。自造模第二周開始，CP組大鼠體重較VC組顯著降低。CP組大鼠病理特征符合CP病理改變，表現(xiàn)為胰腺正常結(jié)構(gòu)破壞、腺泡萎縮、纖維化和炎癥細胞浸潤。VC組無任何病理改變。CP組大鼠胰腺組織丙二醛(Malondialdehyde, MDA)(1.18±0.37nmol/mgprotvs. 0.22±0.27nmol/mgprot, P

5、<0.05)和羥脯氨酸(650.58±52.27μg/mgvs.167.88±11.20μg/mg, P<0.05)水平顯著高于正常對照組。
　　 結(jié)論：DBTC誘導(dǎo)的CP大鼠模型具有良好的可重復(fù)性。該大鼠模型具有CP典型的病理改變，適用于CP發(fā)病機制和治療研究。
　　 第二部分 Fractalkine/CX3CR1在慢性胰腺炎大鼠胰腺中的表達
　　 目的：檢測VC組和CP組大鼠胰腺中不規(guī)則趨化因子(fracta

6、lkine, FKN)和CX3CR1表達。
　　 方法：16只雄性Wistar大鼠，體重180-200g，隨機分成慢性胰腺炎組(CP組)和對照組(VC組)。DBTC(8mg/kg)尾靜脈單次注射建立CP大鼠模型，對照組尾靜脈注慢性胰腺炎(chronic pancreatitis, CP)是由多種因素造成的胰腺組織進行性的慢性炎癥性疾病，最終導(dǎo)致胰腺內(nèi)、外分泌功能不全。CP患者臨床表現(xiàn)為腹痛、脂肪瀉、糖尿病胰腺鈣化及胰腺假性囊腫等

7、。CP在病理學(xué)上主要表現(xiàn)為大量的炎細胞浸潤，胰腺組織廣泛的纖維化，腺泡萎縮，胰管變形，其中纖維化的形成和大量細胞外基質(zhì)(extracelluar matrix, ECM)的沉積為主要病理學(xué)特征。由于其病因復(fù)雜，發(fā)病機制不明確，目前尚無針對纖維化有效的治療方法。
　　 第三部分 α-生育酚和TRF對CP治療作用對比及機制研究
　　 目的：對比α-生育酚(Tocopherol, Toc)和富含生育酚三烯的棕櫚油(Tocotr

8、ienols-rich Fraction, TRF)對CP大鼠治療效果，并研究其作用機制。
　　 方法：32只雄性Wistar大鼠，隨機分成四組，其中三組大鼠造模后分別給予0.6ml大豆油、0.6ml含有α-Toc(800mg/kg)的大豆油及0.6ml含有TRF(800mg/kg)的大豆油每日1次，連續(xù)灌胃4周。對照組大鼠給予0.6ml大豆油每日1次，連續(xù)灌胃4周。4周，腹腔注射戊巴比妥(50mg/kg)，心臟放血處死大鼠。H

9、E染色后行組織病理學(xué)評分來判斷胰腺組織損傷程度；以Sirius-Red染色和胰腺組織勻漿羥脯氨酸水平來評估胰腺組織纖維化程度；使用免疫組化法檢測胰腺α-平滑肌動蛋白(α-smooth muscular actin, α-SMA)的表達，并對4組大鼠胰腺組織α-SMA陽性細胞進行評分。采用real-time RT-PCR法分別檢測胰腺組織中TGF-β1和collagen(col)-α1(I)mRNA的表達。
　　 結(jié)果：α-Toc

10、和TRF都能降低CP大鼠胰腺MDA水平,改善炎癥細胞浸潤和纖維化病理評分并下調(diào)TGF-β1和col-α1(I)mRNA的表達。在改善炎癥細胞浸潤和纖維化病理評分并下調(diào)TGF-β1mRNA的表達方面，TRF較α-Toc更為有效。
　　 結(jié)論：口服α-Toc和TRF都能改善DBTC誘導(dǎo)的CP大鼠胰腺炎癥和纖維化程度，TRF較α-Toc更為有效。
　　 通過上述研究，本課題得出以下結(jié)論：
　　 1、DBTC(8mg/k