生態(tài)免疫腸內(nèi)營養(yǎng)對重癥胰腺炎大鼠腸道和胰腺的影響及作用機制的研究.pdf

1、[目的] 構(gòu)建重癥胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)大鼠模型，進行早期腸內(nèi)營養(yǎng)支持干預，給予普通腸內(nèi)營養(yǎng)(early enteral nutrition,EN)或生態(tài)免疫腸內(nèi)營養(yǎng)(ecoimmunorlutrition，EIN)，檢測牛態(tài)免疫腸內(nèi)營養(yǎng)制劑在大鼠SAP中對保護腸黏膜、維護腸屏障功能，降低內(nèi)毒素血癥、保護胰腺等方面的作用，以為臨床上早期生態(tài)免疫腸內(nèi)營養(yǎng)治療重癥胰腺炎提供動物實驗依據(jù)，

2、旨在對SAP患者的治療提供一定的指導。 [方法] 1、大鼠SAP模型和腸內(nèi)營養(yǎng)支持模型的建立； 20只SD大鼠(體重250±20g)，隨機分為假手術(shù)組5只(PS組)，重癥胰腺炎組15只(SAP組)，SAP組分為SAP6h、SAP24h、SAP48h三個時間點觀察組，各組5只。SAP組采用胰腺被膜下均勻注射3.8％?；悄懰徕c(1ml/kg)造模，比較對照組和造模組各時間點血清淀粉酶和胰腺病理的情況。 采用開

3、腹行胃空腸置管手術(shù)，建立大鼠腸內(nèi)營養(yǎng)支持模型。 2、生態(tài)免疫腸內(nèi)營養(yǎng)對SAP大鼠腸道和胰腺的影響及作用機制： 64只SD大鼠(體重250±20g)，隨機分為假手術(shù)組(PS組)，重癥胰腺炎組(SAP組)，重癥胰腺炎早期普通腸內(nèi)營養(yǎng)組(EN組)，重癥胰腺炎早期生態(tài)免疫腸內(nèi)營養(yǎng)組(ElN組)，每組16只。PS組及SAP組造模術(shù)后18h自由飲食、飲水，EN組造模術(shù)后18h給予普通腸內(nèi)營養(yǎng)支持，EIN組給予牛態(tài)免疫腸內(nèi)營養(yǎng)支持。分

4、別于造模術(shù)后第4天(8只)和第7天(8只)取材，檢測血、胰腺、肝臟等組織腸道菌群易位、血漿內(nèi)毒素、腸通透性、腸黏膜形態(tài)學及超微結(jié)構(gòu)改變，胰腺病理學評分等。從多個角度研究EIN對SAP大鼠腸道及胰腺的影響及其機制。 3、Realtime-PCR在檢測SAP大鼠組織細菌易位的應用24只SD大鼠(體重250±20g)，隨機分為假手術(shù)對照組(PS組)，SAP 4d組，SAP 7d組，每組各8只，造模方法同上，術(shù)后18h自由飲食、飲水。時

5、間點到后，收集血、肝臟、腸系膜淋巴結(jié)、胰腺標本，將組織研磨后，應用QiampDNA mini kit，提取各樣本DNA。設(shè)計合成細菌16sRDNA基因通用引物，采用熒光染料SYBR GrENI Realtime-PCRPCR法，定量檢測各樣本細菌16sRDNA基因濃度，比較各組之間的差異，以研究Realtime-PCR法在檢測組織細菌易位方面的應用價值。旨在為臨床上早期發(fā)現(xiàn)、早期診治SAP細菌易位提供一種更快捷、有效的檢測手段。

6、 4、統(tǒng)計分析 應用SPSS 13.0軟件進行統(tǒng)計分析，計量資料做方差分析或兩組間t檢驗、計數(shù)資料行X2卡方檢驗，檢驗水準α=0.05。 [結(jié)論] 1、 SAP大鼠模型和腸內(nèi)營養(yǎng)支持模型的建立： 本研究證實采用胰被膜下均勻注射?；悄懰徕c，可成功建立SAP動物模型，具有重復性好，死亡率穩(wěn)定，與人類SAP病情相似等優(yōu)點，可適用于SAP的較長期的機制和治療性研究。 本研究采用的腸內(nèi)營養(yǎng)管放置和固定方法，

7、及營養(yǎng)液的接通和輸入模式是成功的。營養(yǎng)液的輸入順暢、均勻、持續(xù)，極少脫出、滲漏，所采用的器材價廉易得，術(shù)后營養(yǎng)支持管理方便，可適用于腸內(nèi)營養(yǎng)支持方面較長期及較大規(guī)模的研究。 2、生態(tài)免疫腸內(nèi)營養(yǎng)對SAP大鼠腸道和胰腺的影響及作用機制； (1)SAP腸黏膜明顯萎縮，絨毛、細胞問緊密聯(lián)結(jié)受到破壞，腸黏膜通透性增加；EN可一定程度上維護腸黏膜結(jié)構(gòu)，保護腸屏障；EIN可顯著改善腸黏膜屏障，促進絨毛生長，維護細胞正常結(jié)構(gòu)，降低腸黏

8、膜通透性； (2)EN、EIN對SAP的胰腺有保護作用，可減輕胰腺病變程度；以EIN作用更顯著。 (3)SAPIh_r普遍存在細菌易位，菌血癥(敗血癥)相對少見，EN、EIN均可抑制SAP腸道細菌易位，以EIN作用更顯著； (4)FN、EIN可顯著減輕SAI導致的內(nèi)毒素血癥，以EIN療效更佳。 3、Realtime-PCR在檢測SAP大鼠組織細菌易位的應用(1)Realtime-PCR是檢測組織細菌易位的