雞免疫功能相關(guān)MHCB-LβⅡ基因篩選及一定純度中藥復方多糖對其免疫調(diào)節(jié)作用研究.pdf

1、目的:本研究利用一定純度的中藥復方多糖，作用于MHC B-LβII基因不同基因型的雞。通過檢測雞不同日齡各項免疫指標，探究一定純度中藥復方多糖對不同基因型雞的免疫調(diào)節(jié)作用，確定對不同基因型雞免疫調(diào)節(jié)作用的最佳中藥復方多糖的濃度，為中藥復方多糖在提高雞免疫能力方面的研究提供理論和試驗依據(jù)。
　　方法：
　　1、用水提醇沉法，對由當歸、黨參、熟地、川芎、山楂、何首烏等11味中藥組成的中藥復方進行粗多糖的提取。
　　2、利用

2、Sevage法除去粗多糖中的蛋白質(zhì)成分后，將多糖經(jīng)過AB-8大孔吸附樹脂吸附解吸，除去色素及小分子雜質(zhì)，進行粗多糖純化；再通過苯酚-硫酸法測定純化后多糖含量，獲得一定純度的中藥復方多糖。
　　3、經(jīng)過DNA提取技術(shù)、PCR-SSCP技術(shù)和基因測序技術(shù)，對500羽黃麻肉雞雛雞進行DNA提取，以及基因分型。
　　4、將一定純度的中藥復方多糖，配制成高劑量(50 mg/mL)、中劑量(25 mg/mL)、低劑量(12.5 mg/m

3、L)3種不同濃度；對不同基因型的雞，分別進行新城疫疫苗免疫、分組、用藥，采集21、42、56、70四個日齡階段的雞外周血，分離血清。
　　5、用ELISA方法檢測21、42、56、70四個日齡階段，雞血清中細胞因子(IL-2、IL-4、IL-6、IFN-α、IFN-γ)含量，新城疫抗體含量。
　　6、用ELISA方法檢測21、42、56、70四個日齡階段，雞血清中CD4+、CD8+淋巴細胞亞群含量，IgG、IgM含量。

4、>　　7、用MTT法檢測21、42、56、70四個日齡階段，雞淋巴細胞轉(zhuǎn)化率，紅細胞凝集法檢測42、56、70三個日齡階，雞段綿羊紅細胞抗體滴度。
　　結(jié)果：
　　1、經(jīng)過提取純化后，利用苯酚-硫酸法檢測，得到含量為77.10％的中藥復方多糖。
　　2、根據(jù)PCR-SSCP以及基因測序結(jié)果，共分出AA、AB、BB、AC、AD五種不同基因型。
　　3、雞各項免疫指標檢測結(jié)果顯示，高劑量組中，AA基因型個體的各項免疫