裙帶菜多糖免疫調(diào)節(jié)作用的體外實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：分離純化出裙帶菜多糖活性成分，觀察裙帶菜多糖對(duì)人外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMC)增殖、淋巴細(xì)胞亞群、細(xì)胞因子分泌的影響，探討裙帶菜多糖的免疫調(diào)節(jié)機(jī)理。 方法： 1.采用逐步分離法對(duì)裙帶菜多糖進(jìn)行分離與純化。采用水提醇沉法進(jìn)行初步分離，柱層析法進(jìn)一步純化，應(yīng)用硫酸--苯酚法進(jìn)行成分鑒定。 2.采用MTT法分析裙帶菜多糖提取物對(duì)人外周血淋巴細(xì)胞體外增殖作用的影響。 3.用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)淋巴細(xì)胞亞群的變化。

2、 4.應(yīng)用酶聯(lián)免疫方法測(cè)定裙帶菜多糖作用后淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子的濃度。 結(jié)果： 1.裙帶菜粗提液經(jīng)Sephadex G-100凝膠過濾層析柱進(jìn)一步純化后，經(jīng)硫酸一苯酚法鑒定，得到單一的對(duì)稱峰，最終得到多糖化合物。 2.裙帶菜多糖對(duì)PBMC增殖的影響與陰性對(duì)照組相比，裙帶菜多糖對(duì)PBMC的增殖反應(yīng)有明顯的促進(jìn)作用，隨著濃度的增加，增殖反應(yīng)明顯增強(qiáng)，其中，20μg/ml濃度組OD值最高(0.216±0.0

3、07)，隨著多糖濃度的繼續(xù)增加,OD值逐漸下降，但仍明顯高于陰性對(duì)照組。 3.裙帶菜多糖對(duì)淋巴細(xì)胞亞群的影響與陰性對(duì)照組相比，不同濃度的裙帶菜多糖可刺激CD4+T細(xì)胞的增殖，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)無顯著性差異；隨著裙帶菜多糖濃度的增加，CD8T細(xì)胞的比例有明顯增加，較陰性對(duì)照組相比有顯著性差異；但各濃度組裙帶菜多糖對(duì)B細(xì)胞增殖反應(yīng)無明顯影響，與陰性對(duì)照組相比無顯著差異；除0.5μg/ml組外，隨著裙帶菜多糖濃度的增加，NK細(xì)胞比例漸增高

4、，與陰性對(duì)照組相比，差異有顯著性，在20μg/m1時(shí)，達(dá)到最高，為9.67±1.53。 4.裙帶菜多糖對(duì)PBMC分泌細(xì)胞因子的影響不同濃度的裙帶菜多糖對(duì)PBMC產(chǎn)生IL-6的作用無明顯影響；但裙帶菜多糖可明顯刺激PBMC產(chǎn)生IL-2，20μg/ml時(shí)達(dá)最高，為陰性對(duì)照組的2.19倍；各濃度組裙帶菜多糖對(duì)PBMNC產(chǎn)生IL-10作用無明顯影響。 結(jié)論： 1.裙帶菜多糖可明顯刺激人外周血淋巴細(xì)胞的增殖。 2.