5個遺傳性球形紅細胞增多癥家系紅細胞膜蛋白缺陷類型及基因突變譜研究.pdf

1、背景與目的:
　　遺傳性球形紅細胞增多癥（hereditary spherocytosis，HS）是一種以貧血、黃疸、脾大為臨床特征的溶血性貧血。世界各地均有HS報道，在北歐和北美地區(qū)，該病的發(fā)病率可達1/2000。約75％的HS表現(xiàn)為常染色體顯性遺傳，約25％的HS表現(xiàn)為常染色體隱形遺傳或新生突變。SPTA1、SPTB、ANK1、SLC4A1和EPB42基因突變導致α收縮蛋白、β收縮蛋白、錨蛋白、帶3蛋白、帶4.2蛋白缺陷或異常

2、。當α收縮蛋白、β收縮蛋白、錨蛋白、帶3蛋白、帶4.2蛋白的其中一種或多種蛋白缺陷時可造成紅細胞膜骨架與脂質雙層間的垂直聯(lián)接減弱，細胞膜以微囊泡形式丟失，紅細胞由正常雙凹圓盤狀變?yōu)榍蛐巍?br>　　HS的診斷通常需結合患者的病史，臨床表現(xiàn)，家族史以及實驗室檢查。Paula H.B.Bolton-Maggs等在2011年發(fā)表的歐美HS診療指南中指出有HS家族史，有貧血、黃疸、脾大典型臨床癥狀，實驗室檢查有球形紅細胞增多、網(wǎng)織紅細胞增多、M

3、CHC增高的患者無需進一步檢查即可診斷。然而，在實際工作中發(fā)現(xiàn)相當一部分HS患者并無以上所有的診斷依據(jù)，這些HS患者常被誤診漏診。SDS-PAGE是診斷HS的經(jīng)典方法，該方法可以確定HS患者為何種膜蛋白缺陷。然而SDS-PAGE敏感性較差，Mariagabriella Mariani等曾對300例HS進行研究，發(fā)現(xiàn)11％的HS用SDS-PAGE無法確定膜蛋白缺陷類型。
　　基因診斷技術的快速發(fā)展為HS的基因診斷帶來了新的方向。目前

4、已發(fā)現(xiàn)HS存在移碼突變、堿基置換突變、插入突變以及缺失突變等類型。然而至今尚未發(fā)現(xiàn)HS的熱突變位點。
　　方法:
　　本研究收集5個HS患者及其家系的外周血，提取紅細胞膜蛋白，利用SDS-PAGE分析患者紅細胞膜蛋白缺陷類型;提取患者外周血DNA，設計并合成相應引物，通過PCR擴增以得到目的產(chǎn)物，使用DNA直接測序方法，與NCBI數(shù)據(jù)庫內(nèi)標準序列進行比對，探明基因突變形式。然后對其家屬進行相關基因突變位點驗證，以了解患者的突

5、變形式，初步探討HS患者分子發(fā)病機制。
　　結果:
　　患者1為帶4.2蛋白完全缺陷，EPB42基因3號外顯子發(fā)生g.5935 G＞A雜合突變。患者2為帶3蛋白部分缺陷，SLC4A1基因4號外顯子發(fā)生g.6505C＞A雜合突變和SLC4A1基因4號內(nèi)含子發(fā)生g.6557 T＞C雜合突變?；颊?帶3蛋白為部分缺陷，SLC4A1基因4號外顯子發(fā)生g.6505 C＞A雜合突變?；颊?未發(fā)現(xiàn)蛋白有明顯缺陷，DNA測序表明患者的SPT

6、B基因29號內(nèi)含子發(fā)生g.55554 A＞T雜合突變?；颊?為帶3蛋白部分缺陷，SLC4A1基因5號外顯子發(fā)生g.7367 T＞G雜合突變。
　　結論:
　　1.SDS-PAGE對于紅細胞膜蛋白完全缺陷的HS患者有很好的診斷價值，但是對紅細胞膜蛋白部分缺陷的HS患者敏感性低。
　　2.重視家系調查和應用MSCV等檢查指標可以提高HS的診斷效率。
　　3.HS突變位點分布散在，同一個家系的HS患者表現(xiàn)為相同的突變方