銅綠假單胞菌群體感應(yīng)系統(tǒng)在生物膜感染中對(duì)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響.pdf

1、目的：探討銅綠假單胞菌的群體感應(yīng)系統(tǒng)在生物膜感染中對(duì)宿主的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響。
　　方法：選取銅綠假單胞菌的三個(gè)菌株即野生株P(guān)AO1和兩個(gè)QS系統(tǒng)的基因缺陷株△la sI△rh lI，△la sR△rh lR采用體外靜態(tài)模型培養(yǎng)3天獲得成熟生物膜，收集生物膜上清液（BCM）。三個(gè)細(xì)菌菌株的BCM分別與人外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs）共通過(guò)培養(yǎng)16 h，用CCK-8法檢測(cè)BC M的細(xì)胞毒性。細(xì)胞懸液離心，其中的細(xì)胞提取總R NA，定

2、量PCR檢測(cè)Foxp3的mRNA水平，而上清液用ELISA法檢測(cè)TGF-β1，IL-10以及IL-6的蛋白水平。另外，采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)調(diào)節(jié)性T細(xì)胞。建立大鼠生物膜感染模型，檢測(cè)Tregs相關(guān)因子Foxp3和TGF-β1，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證QS系統(tǒng)和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞相關(guān)性。
　　結(jié)果：PBMCs經(jīng)BCM處理后，PAO1-BCM，△lasR△rhlR-BCM及△lasI△rhlI-BCM三個(gè)處理組均表現(xiàn)出明顯的細(xì)胞毒性。PAO1-BCM處理組

3、 Foxp3 mRNA表達(dá)量（1.15±0.16）較△lasI△rhlI-BCM及△lasR△rhlR-BCM處理組（0.97±0.11&0.93±0.12）明顯升高（P＜0.05），但是兩個(gè) QS系統(tǒng)缺陷菌株 BCM處理組之間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。而且PAO1-BCM組 TGF-β1的蛋白表達(dá)水平（844.49±40.97 pg/ml）較△lasI△rhlI-BCM及△lasR△rhlR-BCM組的表達(dá)水平（725.69±129.16 pg/

4、ml&740.29±35.86 pg/ml）明顯升高（P＜0.05），類(lèi)似的兩QS系統(tǒng)缺陷菌株的BCM處理組之間比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。但是值得注意的是，PAO1-BCM組IL-10的表達(dá)水平（2.46±1.22 pg/ml）較△lasI△rhlI-BCM及△lasR△rhlR-BCM組的表達(dá)水平（33.29±6.11 pg/ml&35.11±7.72 pg/ml）卻明顯減低（P＜0.05）。而△lasI△rhlI-BCM及△lasR△rhl

5、R-BCM兩個(gè)處理組（799.27±75.66 pg/ml，1305.42±198.48 pg/ml）的IL-6的蛋白表達(dá)量較PAO1-BCM處理組（12.63±8.31 pg/ml）明顯升高。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)Foxp3，TGF-β1的變化與體外實(shí)驗(yàn)的結(jié)果一致。
　　結(jié)論：銅綠假單胞菌QS系統(tǒng)lasI/rhlI基因和lasR/rhlR基因在銅綠假單胞菌生物膜感染中可促進(jìn)宿主的調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的活化，這可能是最終導(dǎo)致臨床上生物膜感染持續(xù)性