miRNA-222在口腔鱗狀細(xì)胞癌組織中的表達(dá)及意義.pdf

1、目的：口腔癌瘤中以鱗狀細(xì)胞癌為最多見(jiàn)，約占80％，位列全身惡性腫瘤的第八位[1]?？谇击[狀細(xì)胞癌（簡(jiǎn)稱口腔鱗癌，Oral Squamous Cell Carcinoma，OSCC）常發(fā)生在40～60歲的成人，男性多于女性。部位以舌、牙齦、頰、腭為多見(jiàn)[2]。OSCC常發(fā)展迅速，早期可向區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，晚期可發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量，甚至威脅生命。口腔癌前病變（Oral Premaignant Lesions，OPL）是指發(fā)生在

2、口腔粘膜中可能演變?yōu)榘┑囊环N病理變化，OPL主要包括白斑（Oral leukoplakia，OLK）、口腔黏膜下纖維化（Oral Submucosal Fibrosis，OSF）和紅斑(Oral erythema)等[3]。16％～62％的口腔鱗癌來(lái)源于白斑惡變[4]。盡管 OSCC在治療方面已取得了很大的進(jìn)展，但是死亡率仍非常高。如何實(shí)現(xiàn)早期預(yù)防、早期診斷及有效治療，是現(xiàn)代醫(yī)學(xué)界關(guān)注的問(wèn)題之一。
　　microRNA（miRNA

3、）是一類穩(wěn)定的短序列非編碼小分子RNA，主要功能是在轉(zhuǎn)錄后水平參與靶基因的調(diào)控[5]。其不但可以直接作為原癌基因或者抑癌基因發(fā)揮作用，而且可以通過(guò)降解或者抑制靶信使RNA(mRNA)的翻譯，從而調(diào)節(jié)癌基因或者抑癌基因的表達(dá)水平。近來(lái)研究已發(fā)現(xiàn)在口腔鱗癌患者中存在異常表達(dá)的miRNA，這些miRNA在口腔鱗癌的發(fā)生發(fā)展中扮演著重要的角色，同樣對(duì)口腔鱗癌的臨床診斷、治療以及預(yù)后判斷發(fā)揮著重要作用。這些特異性表達(dá)的miRNA有望成為新的腫瘤標(biāo)

4、記物。
　　miRNA-222是miRNA家族中的一員，又名has-mir-222，位于X染色體的p11.3區(qū)，在多種腫瘤中表達(dá)異常。在前期研究中，我們小組已經(jīng)證實(shí)miRNA-222在口腔鱗癌患者外周血中高表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)將進(jìn)一步研究miRNA-222在正?？谇火つそM織、口腔白斑組織和口腔鱗癌組織中的表達(dá)及意義，為后期研究miRNA-222在口腔鱗癌中的作用機(jī)制打下基礎(chǔ)。
　　方法：
　　1實(shí)驗(yàn)分組
　　1.1實(shí)驗(yàn)組

5、：選取河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院2014年11月至2015年5月行手術(shù)切除的30例口腔鱗癌組織，其中區(qū)域淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性者為15例，轉(zhuǎn)移陰性者15例；男性患者17例，女性患者13例；40~60歲年齡段19例，其它年齡段11例。30例行手術(shù)切除的口腔白斑組織。樣本采集后置于RNA保存液中低溫貯藏。
　　1.2對(duì)照組：取同期因良性腫瘤行手術(shù)切除者的正常口腔黏膜組織30例作為對(duì)照。樣本采集后置于RNA保存液中低溫貯藏。
　　1.3納入標(biāo)準(zhǔn)

6、：所有組織均經(jīng)病理確診，所有患者術(shù)前均未行放療和化療。
　　2實(shí)驗(yàn)方法
　　2.1組織樣本中總RNA的提取。
　　2.2進(jìn)行RNA濃度和純度檢測(cè)。
　　2.3總的RNA逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)合成cDNA。
　　2.4進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)，檢測(cè)miRNA-222在正常口腔粘膜組織、口腔白斑組織和口腔鱗癌組織中的表達(dá)水平。
　　3統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
　　應(yīng)用SPSS13.0 for Windows統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析

7、，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(-x)±SD）表示，組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本T檢驗(yàn)方法，多個(gè)樣本均數(shù)比較采用單因素方差分析。P<0．05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.正?？谇火つそM織、口腔白斑組織和口腔鱗癌組織中miRNA-222的相對(duì)表達(dá)量分別為0.532±0.24、0.601±0.27、2.401±0.94，三者比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（F=99.38，P＜0.05）。用 LSD檢驗(yàn)方法對(duì)其進(jìn)行兩兩比較，正常口腔粘膜組織、口腔白

8、斑組織比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=1.025，P>0．05)；正?？谇火つそM織、口腔鱗癌組織比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.54，P<0．05)；口腔白斑組織、口腔鱗癌組織比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=10.08，P<0．05)。2．淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移陽(yáng)性和陰性患者口腔鱗癌組織中miRNA-222的相對(duì)表達(dá)量分別為2.063±0.81、2.739±0.97，兩者比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.079，P<0．05)。3．40~60歲年齡段和其它年齡段患

9、者口腔鱗癌組織中 miRNA-222的相對(duì)表達(dá)量分別為2.327±0.95、2.530±0.95，兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.564，P>0．05)。4．男性和女性患者口腔鱗癌組織中 miRNA-222的相對(duì)表達(dá)量分別為2.368±0.97、2.445±0.94，兩者比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意(t=0.052，P>0．05)。
　　結(jié)論：
　　1 miRNA-222在口腔鱗癌組織中高表達(dá)，提示miRNA-222可能在口腔鱗癌的