環(huán)境微生物耐酸元器件的構建與性能評估.pdf

1、微生物修復技術在治理環(huán)境污染方面發(fā)揮著越來越關鍵的作用，并已成功應用于多環(huán)芳烴類污染物的修復和治理。由于環(huán)境污染的多樣性和復雜性，環(huán)境微生物的抗逆性強弱成為微生物修復技術在實際應用中的瓶頸所在。本論文著重于微生物的耐酸性改造方面的研究，通過發(fā)掘 E. coli中的耐酸元件谷氨酸脫羧酶基因(gadBC)和Deinococcus radiodurans R1中的全局調控基因irrE，并進行基因體外克隆、人工修飾，構建重組耐酸質粒 pME-G

2、ad和pME-GirrE，利用電擊轉化的方法分別將耐酸元器件導入了尼古丁降解菌株Pseudomonas putida S16和聯苯降解菌株Pseudomonas putida B6-2中，顯著提高了兩株環(huán)境微生物在低pH(pH5.5、pH4.5、pH4.0)下的生長能力。
　　利用高效液相色譜(HPLC)檢測菌株生長體系中的底物降解，證明了在pH7.0的尼古丁培養(yǎng)基和苯甲酸鈉培養(yǎng)基中，含有pME-Gad和含有pME-GirrE的P

3、. putida S16菌株的生長和降解能力與對照菌株相比并無顯著差異；而在相應的酸性培養(yǎng)基(pH5.5)中，含有耐酸元件的P. putida S16能夠完全降解培養(yǎng)基中的底物尼古丁和苯甲酸鈉，對照菌株幾乎不能生長，也不能降解底物。此外，含有耐酸元件的P. putida B6-2菌株在pH5.5的條件下，能夠在24 h內完全降解底物苯甲酸鈉，而對照菌株不能降解底物。實驗結果充分說明了耐酸元件gadBC和irrE能夠提高P. putida