IL-22、IFN-γ對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6活化、增殖凋亡及TGF-β、TNF-α、ICAM-1、α-SMA的表達(dá)影響.pdf

1、目的：研究IL-22、IFN-γ在體外實(shí)驗(yàn)中對(duì)大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6增殖凋亡作用，及對(duì)肝纖維化相關(guān)因子的表達(dá)影響。
　　方法：將大鼠肝星狀細(xì)胞系HSC-T6分為3組，1.對(duì)照組:未加任何干預(yù)的HSC-T6;2.實(shí)驗(yàn)組A:靜止?fàn)顟B(tài)下的HSC-T6;實(shí)驗(yàn)組B:應(yīng)用TGB-β激活的HSC-T6，分別應(yīng)用不用濃度的重組IL-22(150pg/ml、450pg/ml、750pg/ml、1000pg/ml)及重組IFN-γ(0.1ng/

2、ml、0.3ng/ml、0.6ng/ml、0.9ng/ml)干預(yù)A、B兩組。應(yīng)用免疫熒光法檢測(cè)HSC-T6中α-平滑肌蛋白（α-SMA）表達(dá);cck8(Cell Counting Kit-8)法檢測(cè)IL-22、IFN-γ對(duì)HSC-T6的增殖率影響;Annexin V-PI法檢測(cè)IL-22、IFN-γ對(duì)HSC-T6的凋亡率影響;實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)HSC-T6的TGF-β mRNA、TNF-α mRNA、

3、ICAM-1mRNA表達(dá)水平。應(yīng)用蛋白免疫印跡雜交(Westem-blot)檢測(cè)HSC-T6中α-SMA蛋白表達(dá)量。
　　結(jié)果：
　　1、光鏡下顯示經(jīng)與對(duì)照組相比，TGF-β1處理24小時(shí)后的HSC-T6細(xì)胞形態(tài)明顯變形，胞漿減少，體積縮小，折光性增強(qiáng)，呈成纖維細(xì)胞化狀態(tài)。免疫熒光結(jié)果提示95％以上的活化的HSC-T6呈陽(yáng)性表達(dá)。
　　2、活化后的HSC-T6細(xì)胞細(xì)胞增殖率提示:(1) IL-22濃度為1000pg/m

4、l細(xì)胞組抑制增殖明顯，750pg/ml、1000pg/ml濃度組與HSC-T6細(xì)胞培養(yǎng)基組相比差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);低濃度組中150pg/ml、450pg/ml濃度組與HSC-T6細(xì)胞培養(yǎng)基組細(xì)胞增殖率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(2) IFN-γ濃度為0.9ng/ml細(xì)胞抑制增殖明顯。(3)在重組IL-22和重組IFN-γ組以IL-22濃度為750pg/ml與IFN-γ濃度為0.3ng/ml共同作用細(xì)胞抑制增殖明顯。

5、
　　3、活化后的HSC-T6細(xì)胞各個(gè)濃度干預(yù)組與對(duì)照組相比，凋亡率差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)果顯示(1)IL-22濃度為750pg/ml干預(yù)細(xì)胞組凋亡率最高，但各個(gè)濃度組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);(2)IFN-γ濃度為0.6ng/ml干預(yù)細(xì)胞組凋亡率最高，但各個(gè)濃度組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。(3)重組IL-22預(yù)處理后加入重組IFN-γ組以IL-22濃度為750pg/ml與IFN-γ濃度為0.3

6、ng/ml共同作用凋亡率最高。
　　4、激活期的HSC-T6中TGF-β mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯高于靜止期(P＜0.05)，其中高濃度IL-22干預(yù)組（1000pg/ml）、高濃度IL-22(750pg/ml、1000pg/ml)+IFN-γ共同干預(yù)組相比其他干預(yù)組有明顯抑制作用(P＜0.05); TNF-α mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯高于靜止期(P＜0.05)，其中高濃度IL-22（500pg/ml）+IFN-γ(0.6ng/m

7、l)共同干預(yù)組相比其他干預(yù)組有明顯抑制作用(P＜0.05);激活期ICAM-1 mRNA的相對(duì)表達(dá)量明顯高于靜止期(P＜0.05)，其中高濃度IL-22(500pg/ml)+IFN-γ（0.1ng/ml、0.3ng/ml、0.6ng/ml、0.9ng/ml）共同干預(yù)組明顯抑制作用(P＜0.05)。
　　5、在激活的HSC-T6細(xì)胞IL-22干預(yù)后的α-SMA表達(dá)量相比于對(duì)照組呈濃度依賴(lài)性下降(P＜0.05）。在激活的HSC-T6細(xì)

8、胞IFN-γ干預(yù)后的α-SMA表達(dá)量相比于對(duì)照組呈濃度依賴(lài)性下降(P＜0.05)。IL-22與IFN-γ共同作用組與對(duì)照組相比，α-SMA表達(dá)量明顯下降(P＜0.05)，以IL-22濃度為500pg/ml與IFN-γ濃度為0.6ng/ml共同作用組表達(dá)量最低。多組間比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　結(jié)論：IL-22在體外與IFN-γ起協(xié)同作用，抑制激活狀態(tài)肝星狀細(xì)胞的增殖凋亡，下調(diào)TGF-β、TNF-α基因的表達(dá)，上調(diào)