小鼠腔前卵泡、GV期卵母細(xì)胞及卵巢組織冷凍保存技術(shù)的研究.pdf

1、本試驗(yàn)首次采用OPS法對(duì)小鼠GV期卵母細(xì)胞(不帶顆粒細(xì)胞，下同)及經(jīng)體外培養(yǎng)0、2、4、6、8d后的卵泡進(jìn)行玻璃化冷凍，同時(shí)首次嘗試用EDFS30對(duì)小鼠卵巢進(jìn)行細(xì)管法玻璃化冷凍，以研究冷凍后腔前卵泡和GV期卵母細(xì)胞的發(fā)育潛力。首先分別比較了不同激素(FSH、LH)濃度(組1：5μg/mL；組2：10μg/mL；組3：15μg/mL)和不同培養(yǎng)方法(單一培養(yǎng)和共培養(yǎng))對(duì)小鼠腔前卵泡和GV期卵母細(xì)胞的培養(yǎng)效果，并把效果較好的培養(yǎng)方式分別用于

2、玻璃化冷凍后的腔前卵泡和GV期卵母細(xì)胞的培養(yǎng)。腔前卵泡及GV期卵母細(xì)胞冷凍解凍后，通過觀察其形態(tài)正常率、存活率和MII期卵母細(xì)胞形成率來綜合判斷其體外發(fā)育能力。 添加10μg/mLFSH、10μg/mLLH組培養(yǎng)小鼠腔前卵泡其平均每天直徑增加值與其它各組相比差異顯著(P＜0.05)，其腔前卵泡體外發(fā)育成熟率也相對(duì)高于其它各組；新鮮GV期卵母細(xì)胞單一培養(yǎng)后的體外成熟率(74.2％)高于共培養(yǎng)的成熟率(69.6％)，但無顯著性差異(

3、P＞0.05)。 腔前卵泡經(jīng)體外培養(yǎng)0d，2d解凍后形態(tài)正常率、存活率和成熟率與對(duì)照組均無顯著差異(P＞0.05)，而體外培養(yǎng)4d、6d、和8d組解凍后形態(tài)正常率(92.5％，91.5％，78.1％)和6d、8d組解凍后存活率(86.4％，75.2％)與對(duì)照組(100％，100％)均有極顯著差異(P＜0.01)，體外培養(yǎng)4d、6d、和8d組解凍后在成熟率(11.0％，4.1％，0％)與對(duì)照組(21.8％)存在顯著差異(P＜0.0

4、5)；OPS法冷凍的GV期卵母細(xì)胞解凍后形態(tài)正常率高達(dá)92.6％，體外成熟率及受精后卵裂率(71.1％，35.4％)與對(duì)照組(72.5％，46.5％)差異不顯著(P＞0.05)；細(xì)管法冷凍卵巢組的GV期卵母細(xì)胞成熟率極顯著低于對(duì)照組和OPS組(33.3％vs72.5％,71.1％)(P＜0.01)，其體外受精后未獲得受精卵。 上述結(jié)果表明：小鼠腔前卵泡經(jīng)體外培養(yǎng)0d、2d后較冷凍效果好，OPS法可有效地冷凍保存小鼠GV期卵母細(xì)胞