助孕Ⅰ號(hào)方孕前直腸給藥對腎虛血瘀模型大鼠妊娠早期子宮蛻膜血流灌注的影響.pdf

1、目的：
　　基于腎虛血瘀是影響妊娠情況的常見病機(jī)之一，本研究通過復(fù)制腎虛血瘀大鼠模型，觀察助孕Ⅰ號(hào)方孕前直腸給藥對孕后腎虛血瘀模型大鼠血液流變學(xué)、子宮蛻膜病理組織學(xué)的影響，用藥后大鼠一般情況的改善以及各組大鼠發(fā)現(xiàn)陰栓或精蟲后第八天的妊娠情況，探討助孕Ⅰ號(hào)方改善妊娠情況的機(jī)理。為助孕Ⅰ號(hào)方的臨床療效提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)，為進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　　將普通級(jí)SD雌性大鼠60只常規(guī)喂養(yǎng)一周，進(jìn)行陰道涂片判定雌鼠的

2、動(dòng)情周期。選擇動(dòng)情前期為入組標(biāo)準(zhǔn)，稱重編號(hào)，按完全隨機(jī)法將同一批動(dòng)情前期的大鼠分為6組，直至60只大鼠篩選分組完畢，每組各10只，即空白組、模型組、陽性藥物對照組（五子組和丹參組）、助孕Ⅰ號(hào)方高劑量組（14.6g生藥/kg）和助孕Ⅰ號(hào)方低劑量組（7.3g生藥/kg）。除空白組外，每組大鼠均采用羥基脲450mg/(kg·d)灌胃，每日一次，連續(xù)10天；第四天開始腎上腺素0.3mg/(kg·d)皮下注射，每日一次，連續(xù)7天，造成腎虛血瘀模型

3、，空白組大鼠每日同時(shí)間給予生理鹽水5mL/kg灌胃10天，第四天開始加用生理鹽水2mL/kg皮下注射連續(xù)7天。造模的同時(shí)，助孕Ⅰ號(hào)方高劑量組大鼠給予助孕Ⅰ號(hào)方高劑量濃縮浸膏（14.6g生藥/kg）灌腸治療；助孕Ⅰ號(hào)方低劑量組大鼠給予助孕Ⅰ號(hào)方低劑量濃縮浸膏（7.3g生藥/kg）灌腸治療；五子組大鼠給予五子衍宗丸混懸液（0.5g生藥/kg）灌胃治療；丹參組大鼠給予復(fù)方丹參片混懸液（0.45g生藥/kg）灌胃治療；空白組及模型組大鼠給予生理

4、鹽水5mL/kg灌腸治療。造模結(jié)束后，各組大鼠通過陰道分泌物涂片篩選出處于動(dòng)情期的雌鼠，以雌雄2：1的比例合籠，以次晨發(fā)現(xiàn)陰栓或精蟲計(jì)為妊娠第一天。每組大鼠給藥至妊娠前一天，妊娠后自由飲食，分籠飼養(yǎng)至妊娠第8天，觀察大鼠精神、活動(dòng)、耐力、大便及和舌質(zhì)等一般情況，取股動(dòng)脈血3ml后脫頸椎處死，取出子宮組織，稱重后放入中性甲醛中固定，觀察各組大鼠子宮、胚泡形態(tài)及胚泡著床數(shù)，計(jì)算各組大鼠妊娠率。各組隨機(jī)選取6只動(dòng)物的血液和子宮組織標(biāo)本送檢。通

5、過全自動(dòng)血液流變儀檢測各組大鼠妊娠第8天的血液流變學(xué)狀態(tài)；通過免疫組化法檢測各組大鼠妊娠第8天子宮蛻膜組織中VEGF、FLK-1、ES的蛋白表達(dá)情況，以及子宮蛻膜間質(zhì)組織中螺旋血管的數(shù)量。
　　結(jié)果：
　　1.藥物對大鼠妊娠早期一般情況的影響
　　與空白組相比，模型組大鼠的精神、活動(dòng)、耐力、大便及和舌質(zhì)等一般情況普遍較差；與模型組相比，陽性藥物對照組（五子組、丹參組）、助孕I號(hào)方高、低劑量組大鼠的一般情況均得到一定程度

6、的改善。提示，助孕Ⅰ號(hào)方能改善腎虛血瘀模型大鼠的一般情況，對腎虛血瘀癥狀有明顯的治療作用。
　　2.藥物對大鼠發(fā)現(xiàn)陰栓后第8天妊娠情況的影響
　　與空白組相比，模型組大鼠發(fā)現(xiàn)陰栓后第8天的妊娠率及胚泡著床數(shù)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與模型組相比，助孕Ⅰ號(hào)方高劑量組大鼠發(fā)現(xiàn)陰栓后第8天的妊娠率及胚泡著床數(shù)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）；助孕Ⅰ號(hào)方低劑量組、五子組、丹參組大鼠妊娠率及胚泡著床數(shù)有升高的趨勢，

7、差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。提示，助孕Ⅰ號(hào)方能有效改善腎虛血瘀模型大鼠的早期妊娠情況。
　　3.藥物對大鼠妊娠早期血液流變學(xué)的影響
　　與空白組相比，模型組大鼠血液流變學(xué)各值顯著升高（紅細(xì)胞變形指數(shù)顯著降低），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。與模型組相比，陽性藥物對照組（五子組、丹參組）、助孕I號(hào)方高、低劑量組大鼠的血液流變學(xué)各值均降低或顯著降低（紅細(xì)胞變形指數(shù)升高或顯著升高），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0

8、.01)。此外，助孕Ⅰ號(hào)方高劑量組大鼠血液流變學(xué)部分指標(biāo)低于或顯著低于五子組或丹參組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。提示，助孕Ⅰ號(hào)方能改善腎虛血瘀模型大鼠血液流變學(xué)各指標(biāo)。其中助孕Ⅰ號(hào)方高劑量對改善血液流變學(xué)部分指標(biāo)的療效優(yōu)于五子衍宗丸或復(fù)方丹參片。
　　4.藥物對大鼠妊娠早期子宮蛻膜間質(zhì)組織中螺旋血管數(shù)量的影響
　　與空白組相比，模型組大鼠子宮蛻膜間質(zhì)組織中螺旋血管數(shù)量顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.

9、01)。與模型組比較，藥物干預(yù)組大鼠子宮蛻膜間質(zhì)組織中螺旋血管數(shù)量增高或顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)。此外，助孕Ⅰ號(hào)方高劑量組大鼠子宮蛻膜間質(zhì)組織中螺旋血管數(shù)量有多于丹參組、少于空白組的趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。提示，助孕Ⅰ號(hào)方能增加腎虛血瘀模型大鼠子宮蛻膜間質(zhì)組織中螺旋血管的數(shù)量，且助孕Ⅰ號(hào)方高劑量的療效有優(yōu)于復(fù)方丹參片的趨勢。
　　5.藥物對大鼠妊娠早期子宮蛻膜組織中血供相關(guān)因子（V

10、EGF、FLK-1、ES）含量的影響
　　與空白組比較，模型組大鼠子宮蛻膜組織中VEGF、FLK-1的含量均顯著降低，ES的含量顯著增高，VEGF與ES的含量之比顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；助孕Ⅰ號(hào)方低劑量組大鼠子宮蛻膜組織中VEGF的含量顯著降低，ES的含量顯著增高，VEGF與ES的含量之比顯著降低，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。與模型組比較，助孕Ⅰ號(hào)方高劑量組、丹參組大鼠子宮蛻膜組織中VEGF、FLK-

11、1的含量增高或顯著增高，ES的含量顯著降低，VEGF與ES的含量之比增高或顯著增高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05或P＜0.01)；助孕Ⅰ號(hào)方低劑量組大鼠子宮蛻膜組織中VEGF、FLK-1的含量有增高的趨勢，ES的含量有降低的趨勢，VEGF與ES的含量之比有增高的趨勢，但差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；五子組大鼠子宮蛻膜組織中VEGF的含量升高，ES的含量顯著降低，VEGF與ES的含量之比升高或顯著升高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0

12、.05或P＜0.01)，F(xiàn)LK-1的含量有升高的趨勢，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。說明，助孕Ⅰ號(hào)方高劑量能明顯改善腎虛血瘀模型大鼠子宮蛻膜組織中血供相關(guān)因子的表達(dá)。
　　6.各組大鼠妊娠早期子宮蛻膜組織中螺旋血管數(shù)量與VEGF、FLK-1、ES含量的相關(guān)性
　　各組大鼠妊娠早期子宮蛻膜組織中螺旋血管血量與VEGF的含量呈直線正相關(guān)，與ES的含量呈直線負(fù)相關(guān)，與FLK-1的含量不具有直線相關(guān)性。
　　結(jié)論：

13、>　　1.助孕Ⅰ號(hào)方高劑量孕前直腸給藥能明顯增加腎虛血瘀模型大鼠的妊娠率及胚泡著床數(shù)，有效改善其早期妊娠情況。其作用機(jī)制可能為：助孕Ⅰ號(hào)方高劑量孕前直腸給藥改善了腎虛血瘀模型大鼠妊娠早期子宮蛻膜的血流灌注情況，豐富了子宮、胎盤組織的血液供應(yīng)，為胚胎的生長發(fā)育提供所需的營養(yǎng)物質(zhì)，從而達(dá)到改善早期妊娠的目的。具體表現(xiàn)在以下兩個(gè)方面：
　　（1）助孕Ⅰ號(hào)方孕前直腸給藥可明顯改善腎虛血瘀模型大鼠妊娠早期血液流變學(xué)的各項(xiàng)指標(biāo)，減輕血液的濃、

14、粘、凝、聚狀況，提高螺旋血管的有效血容量，從而改善子宮蛻膜組織的血流灌注情況。
　?。?）助孕Ⅰ號(hào)方孕前直腸給藥能增加腎虛血瘀模型大鼠妊娠早期子宮蛻膜間質(zhì)組織中螺旋血管的數(shù)量，從而改善子宮蛻膜組織的血流灌注情況。
　　2.助孕Ⅰ號(hào)方孕前直腸給藥增加腎虛血瘀模型大鼠妊娠早期子宮蛻膜間質(zhì)組織中螺旋血管數(shù)量的機(jī)制可能為：助孕Ⅰ號(hào)方高劑量能提高子宮蛻膜組織中VEGF、FLK-1的陽性表達(dá)率，并激活VEGF/FLK-1通路；同時(shí)降低E