復(fù)合N-乙酰半胱氨酸(NAC)的絲素蛋白磷酸鈣骨水泥的細胞相容性及成骨性能研究.pdf

1、目的：制備負載N-乙酰半胱氨酸（N-acetyl cysteine，NAC）的絲素蛋白磷酸鈣骨水泥（α-Tricalcium Phosphate/Silk Fibroin-N-acetyl cysteine,α-TCP/SF-NAC），探討其緩釋特性，細胞相容性及成骨性能。
　　方法：向絲素溶液中加入不同體積的1M NAC溶液配置成含有不同濃度NAC的6％SF（SF-NAC10mM，NAC1; SF-NAC25mM，NAC2）固化

2、液，將α-TCP粉末與固化液按1g/0.4ml的比例混合制備α-TCP/SF-NAC骨水泥。使用紫外分光光度儀對α-TCP/SF-NAC骨水泥藥物釋放情況進行評估。采用骨水泥浸提液與rBMSCs共培養(yǎng)，以MTS法、乳酸脫氫酶（Lactate Dehydrogenase，LDH）活性檢測、免疫熒光染色檢測復(fù)合骨水泥的細胞毒性。采用骨水泥與rBMSCs共培養(yǎng)，檢測堿性磷酸酶（Alkline Phosphatase，ALP）活性及RT-PCR

3、檢測成骨標(biāo)志性蛋白Col-Ⅰ、ALP和轉(zhuǎn)錄因子Runx2的相對表達量，評價復(fù)合骨水泥成骨活性。
　　結(jié)果：NAC可從負載NAC的絲素蛋白磷酸鈣骨水泥（α-TCP/SF-NAC）中緩慢釋放，釋放呈濃度依賴性。3w時 NAC1及 NAC2的釋放率分別為45.25±2.55%及59.15±5.73%。細胞在α-TCP/SF-NAC骨水泥浸提液中生長良好，外形無明顯異常，無明顯細胞毒性。rBMSCs在α-TCP/SF-NAC骨水泥表面成骨

4、誘導(dǎo)3天后，NAC1組和NAC2組細胞培養(yǎng)基上清ALP活性高于對照組（p<0.05），其中NAC2組顯著高于其他各組（p<0.01）。在誘導(dǎo)培養(yǎng)后，NAC1組及NAC2組細胞的Col-Ⅰ、ALP與Runx2的相對表達量高于對照組，且隨培養(yǎng)時間的延長逐漸增高。
　　結(jié)論：負載不同濃度NAC的絲素蛋白磷酸鈣骨水泥能夠緩慢持續(xù)釋放NAC。負載不同濃度NAC的絲素蛋白磷酸鈣骨水泥無細胞毒性，不影響細胞增殖。負載不同濃度NAC的絲素蛋白磷酸