絲素蛋白-雙相磷酸鈣-硫酸鈣復合骨水泥的生物安全性研究.pdf

1、目的：研究評價絲素蛋白/雙相磷酸鈣/硫酸鈣復合骨水泥的生物安全性，為后期材料的研制開發(fā)和臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。
　　 方法：參照GB/T16886-2008/ISO10993：2003和GB/T16175-2008標準，通過體外試驗（細胞毒性試驗和溶血試驗）和體內(nèi)試驗（急性全身毒性試驗、熱原試驗、微核試驗、皮內(nèi)刺激試驗、致敏試驗、肌肉植入試驗），評價骨水泥的生物安全性。（1）在細胞毒性試驗中，將L929細胞復蘇傳代后，制成單細胞

2、懸液，接種培養(yǎng)2d、4d、8d。采用MTT法，測定各組細胞增殖率。（2）在溶血試驗中，將新鮮2％的人血紅細胞懸液加入實驗組和對照組，測各組吸光度值，計算溶血率。（3）在急性全身毒性試驗中，經(jīng)小鼠尾靜脈將醋酸鉛溶液、生理鹽水、三種不同濃度的浸提液注入到相應(yīng)實驗組和對照組。觀察24h、48h、72h時間段的小鼠一般情況，并記錄各個時間段的體重。（4）在熱原試驗中，通過靜脈將三種不同濃度的浸提液和對照液注入到實驗組和對照組，觀察體溫變化情況。

3、（5）在微核試驗中，將三種不同濃度的材料浸提液、生理鹽水、環(huán)磷酰胺分別經(jīng)尾靜脈注入各組小鼠體內(nèi)，采用四次染毒法后，處死取骨髓涂片，通過檢測骨髓微核率評估其遺傳毒性。（6）在皮內(nèi)刺激試驗中，采用自身對照法，皮內(nèi)注射浸提液和對照液，觀察局部皮膚刺激情況，并分級。（7）在致敏試驗中，采用最大劑量法，皮內(nèi)注射浸提液和對照液，通過誘導和激發(fā)階段后，觀察激發(fā)部位的皮膚情況。（8）在植入試驗中，將消毒后的PMMA模型和自制的骨水泥模型，植入大白兔豎脊

4、肌內(nèi)，分別于術(shù)后1、4、8、12周各處死動物2只，進行病理切片，行組織學評價。
　　 結(jié)果：（1）細胞毒性試驗中，顯微鏡下觀察可見陽性對照組呈現(xiàn)明顯的細胞毒性，實驗組和陰性對照組細胞形態(tài)正常。實驗組的細胞毒性分級最高為Ⅰ級，陰性對照組為0級，而陽性對照組為V級。（2）溶血試驗中陽性對照組可見溶血現(xiàn)象，而實驗組和陰性對照組均未見溶血現(xiàn)象，實驗組溶血率最高為1.65％。（3）急性全身毒性試驗，術(shù)后實驗組和陰性對照組各只小鼠一般情況良

5、好，無體重減輕，陽性對照組體重明顯下降。（4）熱原試驗中，實驗組和陰性對照組給藥后體溫最高升高為0.06℃，總和小于1.4℃。（5）微核試驗中，實驗組微核最高發(fā)生率為2.49‰，與陰性對照組相比無統(tǒng)計學差異（P>0.05），與陽性對照組相比有統(tǒng)計學差異（P<0.05）。（6）皮內(nèi)刺激試驗中，實驗組的皮內(nèi)刺激指數(shù)為0.0-0.2，是極輕微刺激，陽性對照組為中、重度刺激。（7）致敏試驗中實驗組均未見局部皮膚異常表現(xiàn)，陽性對照組都出現(xiàn)了明顯的