彌漫性毒性甲狀腺腫和橋本甲狀腺炎中細(xì)胞角蛋白-19、血管內(nèi)皮生長因子-C、環(huán)氧化物-2和波形蛋白表達(dá)的病理學(xué)研究及橋本甲狀腺炎中雌激素受體和孕激素受體基因表達(dá)的研究.pdf

1、目的與方法：
　　 Graves病(Grave’s disease，GD)和橋本甲狀腺炎(Hashimoto’s Thyroiditis，HT)為器官特異性自身免疫性甲狀腺疾病(AITD)的兩種主要表現(xiàn)形式，其病理分型與間質(zhì)淋巴細(xì)胞浸潤程度相關(guān)。根據(jù)間質(zhì)淋巴組織浸潤程度將GD分為三型，其浸潤程度分別為：Ⅰ型(<10％)，Ⅱ型(10％～20％)，Ⅲ型(20％～40％)；根據(jù)Woolner’s分類法將HT分為三型，其淋巴組織浸潤程度

2、分別為：淋巴細(xì)胞型(Lymphoid type，L型：20％～40％)，嗜酸性上皮細(xì)胞型(Oxyphilic epithelium type，O型：40％～80％)，明顯上皮破壞型(Pronounced epithelium destruction type，P型：80％～100％)。國內(nèi)外關(guān)于CK-19、VEGF-C、COX-2和Vimentin在甲狀腺乳頭狀癌和濾泡癌中的表達(dá)的研究報(bào)道較多，在良性病變AITD中的研究較少。本文第一部

3、分采用免疫組織化學(xué)方法對GD和HT中CK-19、VEGF-C、COX-2和Vimentin的表達(dá)進(jìn)行檢測，通過分析四種指標(biāo)在GD、HT中的表達(dá)，探討這四種指標(biāo)的表達(dá)與GD和HT的診斷、鑒別診斷、淋巴細(xì)胞浸潤、病情進(jìn)展之間的關(guān)系。CK19、VEGF-C、COX-2和Vimentin在GD、HT的陽性表達(dá)率的比較采用x2檢驗(yàn)(Fisher檢驗(yàn))，陽性強(qiáng)度比較采用秩和檢驗(yàn)。兩組等級資料的相關(guān)性采用雙變量相關(guān)分析(Bivariate)等級相關(guān)系

4、數(shù)(Spearman相關(guān)系數(shù))非參數(shù)檢驗(yàn)，GD和HT年齡比較采用兩獨(dú)立樣本的t檢驗(yàn)。
　　 本文第二部分應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄PCR(RT-PCR)和熒光定量PCR(SYBR GreenQRT-PCR)兩種方法分別定性和定量檢測HT、甲狀腺乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中雌激素受體(Estrogen receptor；ER)和孕激素受體(Progesterone receptor，PR)基因的表達(dá)情況，主要對職和PR與HT的相關(guān)性進(jìn)行分析，探討性

5、激素與HT發(fā)病及病情嚴(yán)重程度的關(guān)系，為HT的臨床診斷和治療提供理論依據(jù)。熒光定量檢測的ER結(jié)果采用完全隨機(jī)設(shè)計(jì)下定量資料的方差分析。
　　 結(jié)果：
　　 1.GD、HT性別比(男/女)分別為1:5.33、1:18.33，GD性別比與HT的性別比經(jīng)x2檢驗(yàn)差異有顯著性(x2=27.32，P<0.05)。GD、HT平均確診年齡分別為31.72、45.67(歲)，經(jīng)t檢驗(yàn)差異有顯著性(t=-7.03，P<0.01)，GD男性平

6、均確診年齡(40.22歲)高于女性平均確診年齡(30.13歲)，經(jīng)t檢驗(yàn)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.774，P<0.01)，HT男性平均確診年齡(51.67歲)高于女性平均確診年齡(45.35歲)，經(jīng)t檢驗(yàn)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 2.CK-19主要表達(dá)于病變區(qū)甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞的胞漿。HT中CK-19的陽性表達(dá)率(86.2％)顯著高于GD(43.9％)，GDⅢ型(81.3％)顯著高于GDⅠ型(15.8％)，GDⅢ型顯著高于GDⅡ

7、型(40.9％)，HT-P型(100％)顯著高于HT-L型(66.7％)，以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HT中CK-19的陽性表達(dá)強(qiáng)度高于GD，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 3.VEGF-C陽性物質(zhì)主要表達(dá)于病變區(qū)甲狀腺濾泡上皮的胞漿中。HT中VEGF-C的陽性表達(dá)率(96.6％)顯著高于GD(56.1％)，GDⅢ型陽性率(87.5％)顯著高于GDⅠ型(36.84％)，GDⅢ型顯著高于GDⅡ型(50.096

8、)，以上差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。HT中VEGF-C的陽性表達(dá)強(qiáng)度顯著高于GD，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 4.GD、HT各型的甲狀腺濾泡上皮細(xì)胞中均可見到COX-2的陽性免疫反應(yīng)，分布于胞漿中。GD中COX-2的陽性表達(dá)率(91.2％)與HT(93.1％)相近，但HT的陽性表達(dá)強(qiáng)度顯著高于GD，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。GD各型的陽性率分別為GDⅠ型89.5％，GDⅡ型90.9％，GDⅢ型93.

9、8％，陽性率相近。HT各型的陽性率分別為HT-L型85.7％，HT-O型94.7％，HT-P型100.0％，陽性率亦相近，其中HT-O型的陽性表達(dá)強(qiáng)度顯著高于HT-L型，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　 5.Vimentin陽性表達(dá)主要見于GD和HT的濾泡上皮細(xì)胞間的間質(zhì)和部分濾泡上皮細(xì)胞胞漿中。GD和HT中Vimentin的陽性表達(dá)率均為100％，Vimentin在GD中的陽性表達(dá)強(qiáng)度略高于HT，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<

10、0.05)。
　　 6.GD中43.9％的病例CK-19和Vimentin表達(dá)一致(同時(shí)陽性或同時(shí)陰性)，經(jīng)過Spearman等級相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)r=0.223(P>0.05)。HT中86.2％的病例CK-19和Vimenitn表達(dá)一致，經(jīng)過Spearman等級相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)r=0.113(P>0.05)。GD中61.4％病例VEGF-C和COX-2表達(dá)一致，經(jīng)過Spearman等級相關(guān)分析，相關(guān)系數(shù)r=0.209(P>0

11、.05)。HT中93.1％的病例VEGF-C和COX-2表達(dá)一致，經(jīng)過Spearman等級相關(guān)分析，兩者在HT中的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系，相關(guān)系數(shù)r=0.552(P<0.05)。
　　 7.RT-PCR結(jié)果顯示HT、甲狀腺乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫在100～250bp之間均可見ER陽性目的條帶，均未見PR陽性目的條帶。HT的ER陽性率為100％(2/2)，甲狀腺乳頭狀癌的ER陽性率為14％(1/7)，結(jié)節(jié)性甲狀腺腫的ER陽性率為80％(

12、4/5)。
　　 8.熒光定量PCR結(jié)果顯示，HT中ER的表達(dá)量高于甲狀腺乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫。HT與結(jié)節(jié)性甲狀腺腫間，HT與甲狀腺乳頭狀癌間，甲狀腺乳頭狀癌與結(jié)節(jié)性甲狀腺腫間ER表達(dá)量差別均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)論：
　　 1.GD平均確診年齡(31.72歲)低于HT(45.67歲)，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，提示隨著病情由GD向HT不斷進(jìn)展，浸潤程度不斷增加，患者的確診年齡也逐漸增高。GD男性平

13、均確診年齡(40.22歲)高于女性(30.13歲)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此提示不同性別GD的發(fā)病年齡有差別，男性發(fā)病年齡較大。GD、HT性別比(男/女)分別為1:5.33、1:18.33，GD性別比與HT的性別比經(jīng)x2檢驗(yàn)差異有顯著性(P<0.05)，提示GD和HT均以女性多發(fā)，HT的性別差異更大。
　　 2.GD和HT各型中淋巴細(xì)胞浸潤程度呈現(xiàn)連續(xù)性的變化，即GDⅢ>GDⅡ型>GDⅠ型，HT-P型>HT-O型>HT-L型，CK

14、-19、VEGF-C、COX-2陽性表達(dá)率和陽性表達(dá)強(qiáng)度亦有同樣的變化趨勢，提示這三種指標(biāo)在ATID中的表達(dá)水平與其淋巴細(xì)胞浸潤程度有關(guān)。Vimentin在GD和HT各型中的陽性表達(dá)率均為100％，且陽性表達(dá)強(qiáng)度相近，與其淋巴細(xì)胞浸潤程度無關(guān)。
　　 3.GD中61.4％病例VEGF-C和COX-2表達(dá)一致，但兩者無相關(guān)關(guān)系，HT中93.1％的病例VEGF-C和COX-2表達(dá)一致，兩者在HT中的表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系。HT相對于GD有

15、更多的淋巴細(xì)胞浸潤，提示在HT中COX-2似乎也能上調(diào)VEGF-C的表達(dá)，促進(jìn)淋巴細(xì)胞由血管和淋巴管遷移到甲狀腺組織，加重組織的淋巴細(xì)胞浸潤和破壞。
　　 4.綜合檢測CK-19、VEGF-C、COX-2和Vimentin對于GD、HT的診斷、治療、疾病監(jiān)測、評估預(yù)后等具有重要的臨床意義。GD、HT中CK-19、VEGF-C、COX-2和Vimentin各指標(biāo)在疾病發(fā)展中的作用及它們之間的具體關(guān)系有待于進(jìn)一步研究。
　　

16、 5.RT-PCR結(jié)果顯示ER在HT、甲狀腺乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中均有一定程度的表達(dá)，實(shí)時(shí)定量結(jié)果分析顯示HT中的表達(dá)量較高，但三者間ER的表達(dá)量的差別沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。ER在HT、甲狀腺乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫中表達(dá)，雌激素通過作用于ER而發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)作用，因此雌激素與這三種甲狀腺疾病的發(fā)病及病情進(jìn)展有密切的關(guān)系，尤其是與HT的關(guān)系更密切。PR在HT、甲狀腺乳頭狀癌和結(jié)節(jié)性甲狀腺腫三種疾病中未檢測到表達(dá)，可能的原因是這三種甲狀腺