2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、骨肉瘤是骨原發(fā)性惡性腫瘤發(fā)病率最高的疾病,青少年好發(fā)且死亡率高。其惡性程度高、早期肺轉(zhuǎn)移和預(yù)后極差。首選治療方案為保肢手術(shù)并加以大劑量化療;而已發(fā)生轉(zhuǎn)移病人則選擇化療治療,化療起著重大作用?,F(xiàn)今經(jīng)典骨肉瘤化療藥物為順鉑、甲氨蝶呤和阿霉素等。但因其肝腎毒性、骨髓毒性、耳毒性、外周神經(jīng)毒性等副作用和耐藥問題,制約了其臨床上的長期高療效使用,所以骨肉瘤轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)率高居不下。因此,研發(fā)新型低副作用和高療效抗骨肉瘤藥物尤為必要。
  研究發(fā)

2、現(xiàn)釕類配合物能有效抑制腫瘤細(xì)胞生長,具有抑瘤作用強(qiáng)、毒性低、易吸收、易排出且易被腫瘤組織吸收的特點,其中某些釕配合物已經(jīng)進(jìn)入臨床應(yīng)用。
  本研究通過合成的新型釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip作用于骨肉瘤細(xì)胞系MG-63和HOS,通過體內(nèi)外實驗探討驗證其抗腫瘤作用,為治療骨肉瘤提供新的思路和理論基礎(chǔ)。
  目的:
  1通過觀察體外實驗新型釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip對人骨肉瘤細(xì)胞MG-63和HOS凋亡作用的影響,

3、探討釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip對人骨肉瘤的抗腫瘤作用和初步機(jī)制。
  2建立骨肉瘤皮下荷瘤模型,觀察釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip對人骨肉瘤細(xì)胞HOS皮下荷瘤增殖的影響,探討釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip的體內(nèi)抗腫瘤作用,并為釕(Ⅱ)配合物的臨床應(yīng)用提供藥理學(xué)依據(jù)。
  方法:
  1、體外實驗
  1.1 CCK8法檢測釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip對人骨肉瘤MG-63、HOS細(xì)胞株細(xì)胞活性的影響。

4、
  1.2 Hoechst33258熒光染色觀察不同濃度釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip對骨肉瘤細(xì)胞細(xì)胞核的影響。
  1.3 AO/EB熒光染色法觀察不同濃度釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip處理骨肉瘤細(xì)胞后細(xì)胞凋亡形態(tài)變化。
  1.4流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip處理骨肉瘤細(xì)胞后細(xì)胞凋亡情況。
  1.5流式細(xì)胞術(shù)檢測不同濃度釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip處理骨肉瘤細(xì)胞后細(xì)胞周期變

5、化。
  1.6 JC-1熒光探針檢測不同濃度釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip處理骨肉瘤細(xì)胞后線粒體膜電位變化。
  1.7免疫印跡法驗證不同濃度釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip處理骨肉瘤細(xì)胞后凋亡相關(guān)蛋白BCL2、BAX和Caspase3表達(dá)變化。
  2、體內(nèi)實驗
  2.1實驗分組:①空白對照組:生理鹽水;②陽性對照組:順鉑組,3mg/kg;③釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip組:a.低濃度組,1/20 LD

6、50濃度,即1.34mg/kg;b.中濃度組:1/10 LD50濃度,即2.67mg/kg;c.高濃度組:1/5 LD50濃度,即5.35mg/kg。
  2.2模型建立及給藥方案:裸鼠右腋下消毒后注射5×107個細(xì)胞懸液,24h后根據(jù)實驗分組腹腔注射給藥,連續(xù)7天。
  2.3結(jié)果監(jiān)測:瘤塊每隔2天用游標(biāo)卡尺測量腫瘤的長徑和短徑,根據(jù)體積=長×寬2/2計算體積,測量體重變化。給藥18天后,處死裸鼠測量腫瘤重量和肝肺重量,計

7、算臟器系數(shù)評價藥物對臟器損害,計算藥物抑瘤率:(陰性對照組瘤重量-實驗組瘤重量)/陰性對照組瘤重量×100%。
  結(jié)果:
  1、釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip抗骨肉瘤的體外實驗研究
  1.1體外細(xì)胞毒性實驗結(jié)果顯示:釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip能顯著的抑制骨肉瘤細(xì)胞MG-63和HOS的細(xì)胞活性,呈劑量-時間依賴效應(yīng);對MG-63細(xì)胞的24h、48h和72h的 IC50分別為;>500μM、247.98±34

8、.19μM和7.54±0.41μM;釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip對HOS細(xì)胞的24h、48h和72h的IC50分別為:196.5±21.8μM、35.6±2.6μM和22.75±0.44μM。
  1.2 Hoechst-33258染色觀察顯示:與實驗組對比,對照組人骨肉瘤MG-63和HOS細(xì)胞胞核完整,著色均勻,熒光彌散;不同濃度釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip處理細(xì)胞,染色質(zhì)凝聚皺縮,著色不規(guī)則,細(xì)胞核會呈致密濃染,或呈碎

9、塊狀,呈現(xiàn)細(xì)胞凋亡皺縮核碎裂等典型變化,而且與釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip濃度相關(guān)。
  1.3 AO/EB熒光染色法觀察顯示:對照組MG-63細(xì)胞和HOS細(xì)胞,細(xì)胞形態(tài)未改變,呈均勻黃綠色熒光;低濃度釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip處理后細(xì)胞形態(tài)改變,核質(zhì)體呈綠色或橙色,染色質(zhì)濃縮或碎裂呈點狀??梢妷乃兰?xì)胞呈橙黃色或紅色。
  1.4 Annexin V-FITC/PI雙染檢測細(xì)胞凋亡顯示:釕(Ⅱ)配合物dmpNAdp

10、ip能夠誘導(dǎo)MG-63和HOS細(xì)胞凋亡壞死,并呈劑量相關(guān)性。MG-63細(xì)胞藥物處理后(0、25μM、50μM、100μM)的各組凋亡率分別是5.4±0.38%、9.06±1.88%、11.82±2.74%和17.84±0.48%;HOS細(xì)胞藥物處理后(0、25μM、50μM、100μM)的各組凋亡率分別是5.35±0.32%、7.18±0.62%、14.04±1.96%和25.93±4.03%。
  1.5流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期變

11、化顯示:釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip(0、25μM、50μM、100μM)作用于骨肉瘤細(xì)胞MG-63和HOS細(xì)胞24h后流式細(xì)胞儀檢測周期變化,釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip能起S期阻滯,隨劑量增加而S期阻滯效應(yīng)相應(yīng)升高(MG-63:0、25μM、50μM、100μM分別為23.16±2.18%、29.36±1.93%、36.45±2.93%和39.62±2.35%;HOS:0、25μM、50μM、100μM分別為31.94±3.

12、83%、38.16±5.32%、41.75±4.4%和41.92±2.6%);而G0/G1期細(xì)胞比例則隨濃度增高而逐漸減少(MG-63:0、25μM、50μM、100μM分別為62.79±6.04%、50.59±3.3%、39.93±0.69%和38.4±2.95%;HOS:0、25μM、50μM、100μM分別為53.45±0.87%、48.45±6.45%、40.88±4.95%和37.83±1.83%);G2/M期變化不明顯。

13、r>  1.6線粒體膜電位JC1探針法檢測結(jié)果顯示:釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip能明顯降低骨肉瘤細(xì)胞線粒體膜電位。對MG-63細(xì)胞,釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip(0、25μM、50μM、100μM)作用24h,流式細(xì)胞儀檢測相應(yīng)藥物濃度對應(yīng)線粒體膜電位降低細(xì)胞比例為:8±4.5%、28.9±4.16%、33.46±6.1%和42.83±3.33%,;對HOS細(xì)胞,釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip(0和6.25μM)作用24h,原

14、位裝載JC-1探針后熒光顯微鏡觀察,探針熒光從紅色向綠色轉(zhuǎn)變明顯;釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip(0、6.25μM、12.5μM、25μM、50μM、100μM和200μM)作用24h,全波長多功能酶標(biāo)儀檢測Green/Red熒光,結(jié)果顯示與陰性對照相比, Green/Red比值隨藥物濃度增加而升高:1.03±0.19、1.19±0.2、1.27±0.18、1.33±0.19、1.39±0.21和1.42±0.21。
  1.7

15、免疫印跡法驗證不同濃度釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip處理骨肉瘤細(xì)胞后凋亡相關(guān)蛋白BCL2、BAX和Caspase3表達(dá)變化,結(jié)果顯示:釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip(0、25μM、50μM、100μM)作用于骨肉瘤細(xì)胞MG-63和HOS細(xì)胞24h,與陰性對照相比,骨肉瘤細(xì)胞內(nèi)抗凋亡蛋白Bcl2表達(dá)水平下降,而促凋亡蛋白Bax和Caspase3表達(dá)升高。
  2、釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip抗骨肉瘤的體內(nèi)實驗研究
  

16、實驗設(shè)定空白對照組,低、中、高三個藥物濃度組,順鉑為陽性對照組。結(jié)果表明:(1)與陰性對照組相比,釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip能有效抑制腫瘤體積增大,隨濃度增高效果越明顯,陽性對照組順鉑效果最強(qiáng);(2)瘤體稱重后結(jié)果表明:與陰性對照組相比,釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip組瘤體重量較輕,且隨藥物濃度增加而降低越明顯,陽性對照順鉑組瘤體重量降低最明顯,結(jié)果與時間-瘤體體積結(jié)果一致。瘤體抑制率:低濃度組為10.06%、中濃度組為12.7

17、%、高濃度組為25.26%,順鉑組為29.2%;(3)裸鼠肝臟和肺部稱重計算臟器系數(shù)表明:與陰性對照組相比,釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip組和陽性對照組沒有統(tǒng)計學(xué)差異,表明釕配合物無肝肺損害或者損害不明顯;(4)裸鼠體重實時監(jiān)測結(jié)果表明,開始給藥后,陽性對照順鉑組對裸鼠體重影響較大,有明顯的降低體重副作用,而釕(Ⅱ)配合物dmpNAdpip組與陰性對照組體重變化無明顯差異,副作用較低。
  結(jié)論:
  1釕(Ⅱ)配合物dm

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