大鼠腦缺血再灌注損傷后IRAK1的表達變化及其相關機制研究.pdf

1、目的:觀察大鼠腦缺血再灌注損傷后大腦皮層中白介素1相關受體激酶1（IRAK1）的表達變化并探討其相關機制。
　　方法:
　　1.在體實驗:將雄性SD大鼠隨機分為正常對照組、假手術組、缺血再灌注組，根據(jù)再灌注時間不同，分為6h、12h、1d、3d、7d組。采用改良的Pulsinelli四血管閉塞法，建立大鼠全腦缺血再灌注模型，應用Western Blot、免疫組織化學、免疫熒光方法檢測各組皮層的IRAK1和Cx43蛋白的表達;

2、在造模前1h予以大鼠腹腔注射Gap26，用Western Blot方法測定IRAK1的表達。
　　2.離體實驗:采用二氯化鈷誘導C6細胞，建立星形膠質細胞化學性缺氧模型，根據(jù)刺激時間不同分為1h、3h、6h、12h、24h組，應用Western Blot方法測定IRAK1和Cx43蛋白的表達;運用siRNA小干擾載體去除培養(yǎng)細胞中的IRAK1，用Western Blot方法測定Cx43蛋白的表達。
　　結果:
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3、）在體實驗:(1) IRAK1蛋白在假手術組大鼠大腦皮層中表達較低;與假手術組比較，IRAK1蛋白在大鼠全腦缺血再灌注損傷后6h開始升高，3d時達到高峰，7d時表達有所下降; Cx43蛋白在假手術組大鼠大腦皮層中表達較低;與假手術組比較，Cx43蛋白在大鼠全腦缺血再灌注后6h開始升高，3d時達到高峰，7d時有所回調;通道蛋白Cx43與IRAK1表達有偶聯(lián)樣改變。(2)通過免疫組織化學法檢測IRAK1蛋白在大腦皮層的表達，結果顯示，IRA

4、K1蛋白在假手術組中的大腦皮層表達較低;與假手術組比較，IRAK1蛋白在缺血再灌注損傷中表達明顯增高，具有顯著差異。(3)通過免疫熒光雙標方法檢測IRAK1蛋白在腦中的細胞定位，結果顯示，在假手術組和缺血再灌注損傷組中，大鼠大腦皮層中GFAP表達(+)的細胞IRAK1表達(+)、在Neun表達(+)的細胞中IRAK1表達（-）、在IBA1表達(+)的細胞IRAK1（-）;與假手術組相比，全腦缺血再灌注損傷后皮層中IRAK1蛋白表達明顯增

5、高，具有顯著性差異。(4)使用Gap26干預Cx43蛋白表達后，IRAK1的表達同樣下調，與未干預組比較有顯著性差異。
　?。ǘ╇x體實驗:(1) IRAK1蛋白在正常對照組表達較低，在二氯化鈷刺激后，IRAK1蛋白在星形膠質細胞中在刺激后3h開始顯著增加，6h達到高峰，12h已降至正常水平;Cx43蛋白的表達在3h開始上調，并在6h到高峰，12h開始下降，具有顯著差異。(2)在化學性缺血缺氧模型中，干預IRAK1蛋白表達后，Cx

6、43蛋白的表達也相應下降，與未干預組比較具有統(tǒng)計學差異。
　　結論:
　　1.大鼠全腦缺血再灌注損傷后IRAK1和Cx43蛋白表達均增高，呈現(xiàn)時間依賴性，且兩者表達有偶聯(lián)樣改變。
　　2.IRAK1主要定位于星形膠質細胞，而通道蛋白Cx43在星形膠質細胞中表達最多，兩者定位相同。
　　3.抑制IRAK1蛋白的表達同時能抑制Cx43蛋白的表達，使用特異性通道阻斷劑Gap26抑制Cx43蛋白的表達也能抑制IRAK1蛋