Survivin相關(guān)凋亡因子在狼瘡性腎炎的發(fā)生發(fā)展中的作用.pdf

1、研究背景： 狼瘡性腎炎(Lupus nephritis)已成為我國(guó)最常見的繼發(fā)性腎炎，也是系統(tǒng)性紅斑性狼瘡(Systemic lupus erythematosus，SLE)的主要致死原因之一。狼瘡性腎炎根據(jù)國(guó)際腎臟病協(xié)會(huì)和腎臟病理學(xué)會(huì)(ISN／RPS)2003年狼瘡性腎炎分類標(biāo)準(zhǔn)可分為Ⅰ～Ⅵ型。從Ⅰ型的輕微病變型狼瘡性腎炎到Ⅵ型的進(jìn)行性硬化型狼瘡性腎炎，反映了狼瘡性腎炎各種類型病變的特點(diǎn)，也可以認(rèn)為狼瘡性腎炎發(fā)展的不同階段。

2、 細(xì)胞凋亡是指由細(xì)胞內(nèi)特定基因控制的程序性細(xì)胞主動(dòng)死亡過程，細(xì)胞凋亡受抑會(huì)使細(xì)胞生存期延長(zhǎng)，是狼瘡性腎炎發(fā)生、發(fā)展的重要機(jī)制之一。Survivin是1997年發(fā)現(xiàn)的凋亡抑制蛋白家族成員，它特異性表達(dá)于胚胎發(fā)育組織及分化未成熟組織。體外研究顯示它能夠抑制細(xì)胞死亡的效應(yīng)蛋白Caspase-3、Caspase-7，能直接或間接地抑制Bax、Fas誘發(fā)的內(nèi)源性及外源性細(xì)胞凋亡，因此它可能在狼瘡性腎炎病變發(fā)展過程中起重要作用。然而，Surv

3、ivin是否參與狼瘡性腎炎發(fā)展及其與相關(guān)凋亡因子在狼瘡性腎炎中的意義及關(guān)系仍未闡明。 目的： 本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)旨在探討Survivin是否參與狼瘡性腎炎發(fā)生發(fā)展，其在由輕微病變型狼瘡性。腎炎到進(jìn)行性硬化型狼瘡性腎炎過程中的變化以及其在凋亡通路中與Caspase-3，Bax、Fas、Bcl-2等相關(guān)凋亡因子可能存在的關(guān)系，同時(shí)通過分析各凋亡因子與臨床病理因素之間的關(guān)系，以尋求可能影響狼瘡性腎炎發(fā)展及預(yù)后的相關(guān)因素。 材料

4、和方法： 收集2006年1月-2006年12月本教研室狼瘡性腎炎病例80例，常規(guī)石蠟切片作HE、PAS、MASSON、PASM染色，觀察病理形態(tài)；冰凍切片作免疫熒光IgG、IgA、IgM、C3、C1qIg、Fg，觀察免疫復(fù)合物沉積；電鏡檢查，進(jìn)一步確定病變的特點(diǎn)。應(yīng)用免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)Survivin、Caspase-3，Bax、Fas、Bcl-2等的表達(dá)，同時(shí)利用原位凋亡標(biāo)記(TUNEL)的技術(shù)檢測(cè)不同類型的狼瘡性腎炎中發(fā)生

5、的凋亡。收集狼瘡性腎炎的腎臟穿刺新鮮標(biāo)本25例，采用半定量RT-PCR技術(shù)檢測(cè)Survivin mRNA在不同類型狼瘡性腎炎組織中的表達(dá)。 結(jié)果： 1、80例狼瘡性腎炎的病理形態(tài)分類，Ⅰ型7例，Ⅱ型19例，Ⅲ型5例，Ⅳ型36例，Ⅴ型10例，Ⅵ型3例。 2、TUNEL結(jié)果顯示：在Ⅰ型輕微病變型和Ⅵ型硬化型的狼瘡性腎炎中。腎小球的凋亡足少見的。而Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型及Ⅴ型等增生性狼瘡性。腎炎的凋亡明顯增多。凋亡指數(shù)AI與

6、蛋白尿之間存在相關(guān)關(guān)系(r=0.312,P=0.005<0.05)，而與血尿的程度及活動(dòng)度均無相關(guān)關(guān)系。 3、Survivin在Ⅰ型輕微病變型狼瘡性腎炎及Ⅵ型硬化型狼瘡性腎炎組織中的表達(dá)極為有限，而在Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型狼瘡性腎炎可見不同程度的Survivin表達(dá)。如Ⅲ型、Ⅳ型的剛性率為100％，Ⅱ型的陽性率為89.5％。Ⅰ型與Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型的表達(dá)存在顯著差異(P<0.05)。Ⅰ型與Ⅱ型、Ⅵ型狼瘡性腎炎的表達(dá)無顯著差異(P>

7、0.05)。Survivin的表達(dá)與活動(dòng)度呈正相關(guān)(r=0.352,P=0.001<0.05)，隨組織活動(dòng)度的增高，Survivin的表達(dá)也上升。Survivin的表達(dá)與蛋白尿、血尿無關(guān)。同時(shí)Pearson相關(guān)檢驗(yàn)也未發(fā)現(xiàn)其與凋亡指數(shù)AI的相關(guān)性。 4、Caspase-3在Ⅰ型輕微病變型狼瘡性腎炎及Ⅵ型硬化型狼瘡性腎炎組織中的表達(dá)極為有限，而在Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型狼瘡性腎炎中的表達(dá)顯著增高，其陽性率均明顯高于Ⅰ型及Ⅵ型狼瘡性腎

8、炎。如在Ⅲ型、Ⅴ型狼瘡性腎炎Caspase-3表達(dá)的陽性率為100％，在Ⅳ型狼瘡性腎炎中表達(dá)的陽性率為97.2％。Caspase-3蛋白的表達(dá)與蛋白尿程度存在正相關(guān)(r=0.268,P=0.016<0.05)，蛋白尿越嚴(yán)重，Caspase-3蛋白的表達(dá)越強(qiáng)，而與活動(dòng)度及凋亡指數(shù)AI存在正相關(guān)(r=0.269,P=0.016<0.05：r=0.230，P=0.040<0.05)。隨組織活動(dòng)度和AI的增高，Caspase-3的表達(dá)也上升，與

9、血尿無明顯的關(guān)系。 5、Fas蛋白在Ⅰ型與Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型狼瘡性腎炎中的表達(dá)存在顯著差異(P<0.05)。而Ⅰ型與Ⅵ型狼瘡性腎炎的表達(dá)無顯著差異(P>0.05)。Fas的表達(dá)與活動(dòng)度呈正相關(guān)(r=0.314,P=0.005<0.05)，隨組織活動(dòng)度的增高，F(xiàn)as的表達(dá)也上升。Fas的表達(dá)與蛋白尿呈正相關(guān)(r=0.243,P=0.030<0.05)。蛋白尿越嚴(yán)重，F(xiàn)as的表達(dá)越強(qiáng)，而也未發(fā)現(xiàn)其與凋亡指數(shù)AI的相關(guān)性。

10、 6、Bax蛋白在Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型狼瘡性腎炎中的表達(dá)顯著增高，其陽性率均明顯高于Ⅰ型及Ⅵ型狼瘡性腎炎。如在Ⅲ型和Ⅴ型狼瘡性腎炎Bax表達(dá)的陽性率為100％，在Ⅳ型狼瘡性腎炎中表達(dá)的陽性率為94.4％。Bax的表達(dá)與蛋白尿、血尿及活動(dòng)度間無明顯的相關(guān)性(P>0.05)，同時(shí)Pearson相關(guān)檢驗(yàn)也未發(fā)現(xiàn)其與凋亡指數(shù)AI的相關(guān)性。 7、Bcl-2蛋白在Ⅱ型、Ⅲ型、Ⅳ型、Ⅴ型狼瘡性腎炎中的表達(dá)顯著增高，Bcl-2其陽性率均明顯高

11、于Ⅰ型及Ⅵ型狼瘡性腎炎。如在Ⅲ型和ⅢⅤ型狼瘡性腎炎表達(dá)的陽性率為100％，在Ⅳ型狼瘡性腎炎中表達(dá)的陽性率為97.2％。Bcl-2的表達(dá)與凋亡指數(shù)AI呈正相關(guān)(r=0.239,P=0.033<0.05)，隨凋亡指數(shù)AI增高，Bcl-2的表達(dá)也上升。Bcl-2的表達(dá)與蛋白尿、血尿無關(guān)。同時(shí)Pearson相關(guān)檢驗(yàn)也未發(fā)現(xiàn)其與活動(dòng)度的相關(guān)性。 8、RT-PCR結(jié)果顯示：Survivin mRNA在Ⅰ型與Ⅱ型、Ⅳ型中的表達(dá)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

12、義(P<0.05)。 9、相關(guān)分析顯示：除了Survivin、Fas、Bax與凋亡指數(shù)之間無相關(guān)性(P>0.05)，其它因素兩倆之間均存在正相關(guān)(P<0.05)。 結(jié)論： 1、各型狼瘡性腎炎中以增生型為主的LN中細(xì)胞凋亡更顯著，凋亡指數(shù)比輕微病變型及硬化型高。這是一種增生型腎小球腎炎自我限制的細(xì)胞凋亡介導(dǎo)的調(diào)控過程，在一定程度上有利于腎小球維持其細(xì)胞量的平衡。 2、Survivin參與了狼瘡性腎炎的發(fā)生與