用于金黃色葡萄球菌與銅綠假單胞菌檢測(cè)的免標(biāo)記型電化學(xué)發(fā)光生物傳感器.pdf

1、基于電化學(xué)發(fā)光(ECL)的生物分析方法不僅保留了化學(xué)發(fā)光(CL)分析的諸多優(yōu)勢(shì)，還具有可控性強(qiáng)、重現(xiàn)性佳、選擇性好和可進(jìn)行原位檢測(cè)等特點(diǎn)?，F(xiàn)有的ECL生物分析方法多為傳統(tǒng)的探針標(biāo)記模式，其標(biāo)記過(guò)程耗時(shí)耗力，需要投入大量的人力成本和時(shí)間成本，并且在標(biāo)記過(guò)程中往往會(huì)使生物分子(例如抗體和酶)活性喪失，影響其分析效果。而免標(biāo)記型ECL生物傳感器由于避免了探針標(biāo)記，能夠提高ECL分析性能，因此開(kāi)發(fā)一類避免傳統(tǒng)ECL標(biāo)記弊端和不足的免標(biāo)記型ECL

2、生物傳感器分析方法就顯得特別必要。故而，本文主要研究了用于金黃色葡萄球菌與銅綠假單胞菌檢測(cè)的兩種免標(biāo)記型ECL生物傳感器：
　　(1)基于免疫球蛋白G和Protein A特異性結(jié)合作用的金黃色葡萄球菌ECL生物傳感器
　　本文利用免疫球蛋白G(IgG)的Fc片段與金黃色葡萄球菌細(xì)胞壁中的Protein A(SPA)的特異性結(jié)合作用，建立了一個(gè)用于檢測(cè)金黃色葡萄球菌的免標(biāo)記型ECL生物傳感器。由于羧基化石墨烯具有較大的比表面積

3、以及良好的電子傳輸能力，本研究將其與IgG進(jìn)行標(biāo)記然后再滴加在玻碳電極表面并用牛血清白蛋白(BSA)進(jìn)行封閉后制成ECL生物傳感器。由于SPA與IgG的Fc段的特異性結(jié)合作用，結(jié)合在生物傳感器上的金黃色葡萄球菌阻礙了ECL界面的電子傳遞以及ECL活性物質(zhì)的擴(kuò)散，結(jié)果導(dǎo)致ECL信號(hào)減小，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)金黃色葡萄球菌的定量分析。所得線性范圍為1.0×103-1.0×109CFU mL-1，檢測(cè)限為3.1×102CFU mL-1。當(dāng)使用研制的EC

4、L生物傳感器進(jìn)行金黃色葡萄球菌的檢測(cè)時(shí)，整個(gè)測(cè)定在70min內(nèi)即可完成。食品、環(huán)境樣品和生物樣品的加標(biāo)回收試驗(yàn)顯示本研究的回收率在75％-116.7%之間。該方法特異性好、操作簡(jiǎn)便、制備簡(jiǎn)單、分析時(shí)間短，為病原菌快速篩查提供了新的途徑。
　　(2)基于銅綠假單胞菌噬菌體特異性識(shí)別作用的銅綠假單胞菌ECL生物傳感器
　　本研究選用銅綠假單胞菌噬菌體(PaP1)特異性識(shí)別銅綠假單胞菌(PA1)的作用，建立了一個(gè)用于檢測(cè)PA1的免

5、標(biāo)記型ECL生物傳感器。由于羧基化石墨烯具有較大的比表面積以及良好的電子傳輸能力，本部分也選用羧基化石墨烯作為PaP1的載體，將其與PaP1進(jìn)行標(biāo)記然后滴加于玻碳電極表面并用BSA進(jìn)行封閉后制成ECL生物傳感器。由于PaP1對(duì)PA1的特異性識(shí)別作用，結(jié)合在ECL生物傳感器表面的PA1阻礙了ECL界面的電子傳遞以及ECL活性物質(zhì)的擴(kuò)散，結(jié)果導(dǎo)致ECL信號(hào)減小，進(jìn)而實(shí)現(xiàn)對(duì)PA1的定量分析。所得線性范圍為1.4×102-1.4×106CFU