cIAP2蛋白抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的分子機(jī)制研究.pdf

1、專業(yè)病原生物學(xué)復(fù)旦大學(xué)博士研究生學(xué)位論文cIAPZ蛋白抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的分子機(jī)制研究Meehanism(s)oftheinhibitionofHBVrePlieationbyeellularinhibitorofaPoPtosisProteinZ博士研究生導(dǎo)師導(dǎo)師組成員王澤坤袁正宏研究員瞿滌研究員顧建新教授—J日睡卜產(chǎn)，二.門〕」仁萬—.資矛——上卜四月復(fù)旦大學(xué)生物醫(yī)學(xué)研究院本課題承國家基礎(chǔ)研究基金伽0.2009cB522504)、

2、國家傳染病防治重大專項(xiàng)(N0.ZooszXloZo3)資助博士學(xué)位論文中文摘要博士學(xué)位論文中文摘要博士研究生王澤坤導(dǎo)師袁正宏cIAPZ蛋白抑制乙型肝炎病毒復(fù)制的分子機(jī)制研究乙型肝炎病毒(HePatitisBvirus，HBv)是一種嚴(yán)重危害人類健康的病原體。己有的研究結(jié)果表明病毒和宿主的相互作用決定著病毒感染清除或持續(xù)性感染的建立。在HBV感染的清除過程中，機(jī)體可通過腫瘤壞死因子一a(TllmneerosisfactalPha，TNF一

3、a)、干擾素詳(Interferonganuna，IFN一丫)、干擾素一a(Interferonalpha，IFN一a)、干擾素一p(Interferonbeta，IFN一p)等細(xì)胞因子介導(dǎo)的非殺細(xì)胞方式抑制HBV復(fù)制，然而這些細(xì)胞因子調(diào)控的抗病毒基因尚未完全闡明。本室前期通過基因芯片等技術(shù)篩選TNF一a誘導(dǎo)的效應(yīng)基因，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞凋亡抑制蛋白2(cellularinhibitofaPoptosisproteinZ，cIAPZ)具有抑制HB

4、v復(fù)制的效應(yīng)，但其具體的抗病毒機(jī)制尚未完全闡明。本研究首先在pCMVHBV復(fù)制系統(tǒng)中驗(yàn)證cIAPZ的抗病毒效應(yīng)。研究結(jié)果顯示，dAPZ并不影響HBV前基因組RNA的水平和衣殼蛋白的合成，但cIAPZ顯著下調(diào)了HBV復(fù)制中間體DNA的水平。siRNA干擾內(nèi)源性dAPZ的表達(dá)后，轉(zhuǎn)入HBV復(fù)制型質(zhì)粒，檢測(cè)內(nèi)源性表達(dá)的dAPZ對(duì)HBV基因表達(dá)和復(fù)制的影響。研究結(jié)果顯示，下調(diào)內(nèi)源性。IAPZ的表達(dá)可明顯增強(qiáng)HBV的復(fù)制，而并不影響病毒轉(zhuǎn)錄的RN

5、A和合成的衣殼蛋白。上述結(jié)果提示cIAPZ可能影響了HBV前基因組RNA逆轉(zhuǎn)錄成DNA過程中的某個(gè)環(huán)節(jié)。為明確cIAPZ抑制HBV的功能區(qū)域，構(gòu)建了cIAPZ的不同缺失突變體。將HBv復(fù)制型質(zhì)粒和。IAPZ截短突變體共轉(zhuǎn)細(xì)胞，檢測(cè)病毒的基因表達(dá)和復(fù)制情況。研究結(jié)果顯示，逐步缺失d”2蛋白N一端的三個(gè)BIR結(jié)構(gòu)域，cIAPZ的抗病毒效應(yīng)有不同程度的削弱，但當(dāng)缺失C一端的CARD和RING兩個(gè)結(jié)構(gòu)域后，cI妙2的抗病毒效應(yīng)完全消失。己知RI